Cromatografia de afinidade

15 Novembro 2017, 18:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Princípios básicos da cromatografia de afinidade.

Equilíbrio de ligação ligando-proteína. Etapas gerais da cromatografia de afinidade.

Propriedades da matriz, do ligando (critérios de selecção) e a importância dos braços espaçadores.

Estratégias de eluição: métodos de eluição selectivo e método de eluição não selectivo.

Exemplos de aplicações.

Cromatografia de exclusão molecular (SEC)

9 Novembro 2017, 17:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Princípios básicos: mecanismo de separação. Normalização do comportamento de eluição: curvas de selectividade.

Propriedades dos géis: gama de fracionamento e limite de exclusão.

Modos de separação: separação de grupos e fracionamento de elevada resolução.

Cuidados práticos na realização da técnica.

Cromatografia de troca ou permuta iónica (IEX)

8 Novembro 2017, 18:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Curvas de titulação de uma proteína.

Princípios básicos da cromatografia IEX: mecanismos de separação em permuta catiónica e aniónica.

Propriedades gerais dos permutadores.

Selecção das condições experimentais: escolha do tipo de permutador, escolha do tampão de eluição (composição, pH e força iónica), cuidados a observar na preparação da amostra e estratégias de eluição selectiva (aplicação de gradientes descontínuo/contínuo de pH, de força iónica ou adição de um ligando carregado).

Etapas na realização de uma cromatografia de troca iónica.

HPLC II

2 Novembro 2017, 17:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Separação de compostos iónicos por RP-HPLC através da anulação das cargas: método da supressão da ionização e método da formação de pares iónicos.

Equipamento de HPLC: bombas, válvulas de injecção, colunas e detectores. Detectores de UV-Vis. Factores de resposta do detector. Propriedades dos solventes usados em HPLC.

Análise qualitativa e quantitativa de amostras (método do padrão externo).

HPLC I

26 Outubro 2017, 17:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Maximização da eficiência cromatográfica em cromatografia líquida. HPLC: cromatografia líquida de elevada eficiência.Equipamento de HPLC.

Cromatografia de partição. Fases ligadas: fase normal e de fase reversa. Eluição isocrática e em gradiente. Selecção da fase estacionária e optimização da separação. GC versus HPLC.