Sumários

Purificação de proteínas III

5 Dezembro 2019, 17:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Proteínas de fusão. Exemplos de tags de afinidade (tags de afinidade de elevada e de baixa massa molecular – vantagens e desvantagens). Remoção do tag de afinidade por proteólise.

Exemplo I – Purificação de proteínas de fusão com GST;

Exemplo II - Purificação de proteínas de fusão com 6xHis/IMAC.

Purificação de proteínas II

4 Dezembro 2019, 16:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

- Princípios gerais de desenvolvimento de um esquema de purificação de proteínas:

(i) Monitorização da proteína total e da proteína a purificar;

(ii) Preparação de quadros de purificação (cálculo do rendimento e grau de purificação da amostra)

(iii) Avaliação do grau de pureza final da amostra

- Produção de proteínas recombinates (metodologia geral de sobre-expressão de proteínas);

- Avaliação da formação de corpos de inclusão.

Purificação de proteínas I

28 Novembro 2019, 17:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Princípios gerais de desenvolvimento de um esquema de purificação de proteínas: objetivo geral da purificação (grau de pureza exigido) versus quantidade de material necessário.

Esquema geral de uma purificação e critérios a ter em atenção na escolha do material fonte.

Fracionamentos por precipitação (técnicas de salting out e precipitação isoléctrica) e por técnicas cromatográficas.

Monitorização da purificação realizada: métodos de quantificação da concentração proteica e de deteção específica da proteína que se pretende purificar.

Cromatografia de afinidade

13 Novembro 2019, 16:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Princípios básicos de separação em cromatografia de afinidade: equilíbrio de ligação ligando-proteína.
Etapas da realização de uma cromatografia de afinidade.
Critérios a observar na seleção da matriz e do ligando.
A importância dos braços espaçadores.
Estratégias de eluição: métodos de eluição selectivos e não selectivos.
Exemplo de aplicações.

Cromatografia de troca iónica, IEX

7 Novembro 2019, 17:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Princípios básicos de separação em cromatografia de troca iónica: permuta catiónica e permuta aniónica.
Força do permutador e capacidade do permutador.
Critérios a observar na escolha do permutador, tampão de eluição, na preparação da amostra e nas estratégias de eluição.
Etapas gerais de uma cromatografia de troca iónica. Apresentação de alguns exemplos.