Aula Prática 1 - ouriço-do-mar
28 Fevereiro 2023, 08:00 • Solveig Thorsteinsdottir
Fertilização o
desenvolvimento precoce no ouriço-do-mar ao vivo.
Objectivo 1:
Observação de oócitos e espermatozóides
Objectivo 2:
Observação da fertilização.
Objectivo 3:
Observação das modificações que ocorrem ao nível do núcleo e citoplasma até a
primeira divisão mitotica. Observação da segunda clivagem. Opcional: obervação
de gastrulas e larvas pluteus no dia seguinte.
Objectivo 4: Executar
uma experiência que testa o efeito da concentração dos espermatozóides no (1)
sucesso da fertilização e (2) a incidência de polispermia. Elaboração de um
gráfico com os resultados obtidos.
Protocolo
da aula:
Observação
de oócitos:
·
Colocar uma gota de oócitos em água do mar numa lâmina e observar no
microscópio (obj. 10x - não usar a objectiva de 40x!!). Identificar
oócitos maduros e imaturos.
·
Adicionar uma gota muito pequena de tinta de China e misturar
com um palito. Observar a geleia.
Observação
de espermatozóides:
(só
podem usar a objetiva de 40x COM LAMELA - a água do mar destrói objectivas!).
·
Preparar sémen diluído em água do mar. Observar com a objetiva de 10x sem
lamela e depois colocar uma lamela e observar com a objetiva
de 40x
Fertilização:
·
Preparar uma caixa de Petri com oócitos em água do mar. Colocar uma gota de
oócitos numa lâmina, colocar no microscópio e focar com a objetiva de
10x.
·
A docente adiciona esperma diluído à caixa de Petri (vai ser usado para
observar as fases de clivagem) e coloca uma gota de esperma na lâmina.
·
Juntar a gota de esperma com a gota de oócitos usando um palito. Observar a
fertilização.
Clivagem:
·
Retirar uma gota de embriões em clivagem da caixa de Petri e observar sem
lamela com a objetiva de 10x. Observar a alteração ao nível do núcleo e a
formação do fuso mitótico.Observar a 1ª divisão mitótica (±40-50* min após a
fertilização), a 2ª divisão mitótica (10-15* min após a 1ª) e a 3ª divisão
mitótica (10-15* min após a 2ª). *depende da temperatura da
sala