Estudo do desenvolvimento embrionário da mosca Drosophila melanogaster.

9 Maio 2023, 13:00 • João Picão Osório

Objectivos:

 - Preparação e observação de embriões de mosca para determinar os estádios de desenvolvimento.
 - Observação de expressão genética durante a embriogénese com “reporters” transgénicos fluorescentes.

 

 

Protocolo:

No lavatório (maioritariamente): colectar embriões e remoção do córion

1. Adicionar um pouco de água da torneira na placa de ágar com embriões e escovar os embriões suavemente com o pincel para ficarem em suspensão.

2. Despejar a água contendo os embriões no cesto de ovos e lavar com água destilada usando uma garrafa de esguicho para eliminar a pasta de levedura. Observar os embriões à lupa.

3. Colocar o cesto com embriões em caixas de petri com lixívia para remover o córion (esta membrana torna o embrião opaco para microscopia). Incubar ~5 min com agitação suave manual e observar periodicamente os embriões à lupa para garantir que o córion foi removido pela perda dos apêndices dorsais na grande maioria dos embriões.

Nota: é altamente recomendável o uso de bata neste passo.

 

4. Lavar imediatamente os embriões com água usando uma garrafa de esguicho para eliminar qualquer resíduo de lixívia.

Na bancada: montagens de embriões em laminas para microscopia

5. Colocar o cesto contendo os embriões em papel. Transferir os embriões sem córion com o pincel para uma lamina com 30μl de 50% Glicerol (ou Halocarbon oil 700), meio de montagem.

6. Espaçar os embriões com uma agulha de dissecação ou palito e colocar gentilmente uma lamela por em cima. Caso o meio de montagem não cubra toda a lamela, adicionar mais meio com uma micropipeta entre a lâmina e lamela. Selar a lamela com verniz das unhas.

Unidade de Microscopia (sala 2.1.15)

7. Levar as lâminas com os embriões para a Unidade de Microscopia, observa-los nos microscópios de fluorescência e fazer a aquisição de imagens com ajuda do técnico de microscopia Luís Marques.