1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão (Protocolos super-reduzidos devido a restrições no nº de aulas (Covid-19)) - 2ª metade das PLs

30 Abril 2021, 14:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão (Protocolos super-reduzidos devido a restrições no nº de aulas (Covid-19)) - 2ª metade das PLs

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Preparação de caixas de meio seletivo (Amp/X-gal). Explicação do tipo de seleção.