Continuação da "Técnica de PCR" e "Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas"

7 Abril 2017, 08:00 • Rita Zilhão

Continuação da técnica de PCR: Variantes da técnica de PCR e suas aplicações: a síntese de cDNA e a RT-PCR, Nested-PCR, sistema ARMS, DOP-PCR e PCR multiplex. Técnicas de mutagénese dirigida baseada em PCR (PCR invertido e SOE-PCR (Splicing by overlapping extension). Selecção e identificação de mutantes. A utilidade do PCR em protocolos de screening.

6. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas

Sistemas de marcação: marcação radioactiva e não-radioactiva de DNA. Marcação de DNA por nick translation. Marcação de DNA por primers aleatórios. Marcação de extremidades 5’ e 3’ do DNA.

O que são técnicas de hibridação de ácidos nucleicos e o seu fundamento. Origem e caracterização das sondas de hibridação de ácidos nucleicos. Os diferentes tipos de sondas e como se obtêm sondas de RNA (ribossondas). Sondas homólogas, heterólogas e degeneradas. Condições de hibridação. Temperatura de fusão/desnaturação (Tm – melting temperature).