Introdução ao tema das PLs e preparação dos vectores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

7 Março 2017, 09:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vector de expressão

Objectivos da clonagem molecular

Preparação dos vectores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vectores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Electroforese em gel analítico Electroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vectores pNM480/481/482.

Electroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vectores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vectores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vectores e fragmento) a utilizar na clonagem.

CONCEITOS: purificação e armazenamento do DNA