Análise dos genes clonados e dos seus produtos

22 Abril 2022, 08:00 • Rita Zilhão

Sondas homólogas, heterólogas e degeneradas. Condições de hibridação. Temperatura de fusão/desnaturação (Tm – melting temperature). 

Sistemas de marcação: marcação radioactiva e não-radioactiva de DNA. Noções muito gerais sobre marcação de DNA por nick translation, por primers aleatórios e de extremidades 5’ e 3’ do DNA. Como se obtêm sondas de RNA (ribossondas).

7. Análise dos genes clonados e dos seus produtos

Hibridação Southern e algumas aplicações (ex. DNA fingerprinting).

Hibridação dot-blot (também para RNA). Técnica de footprinting (DNase I). Deteção de interações DNA/proteína. Técnica de retardação em gel (EMSA – electrophoretic mobility shift assay) aplicada ao DNA e RNA.

Fundamento das técnicas de análise de RNA e suas aplicações: Extracção e purificação do RNA. Eletroforese de RNAs. Hibridação Northern. Hibridação in situ.