continuação do e fim do tema 3 - Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

13 Março 2020, 08:00 • Rita Zilhão

Esta aula foi leccionada por video conferência no dia 16 de Março das 12.00-13.00 e continuou das 18.00-19.00

Substituição a 16 de Março (vídeo conferência colibri.zoom)

Continuação dos vetores de clonagem: fagos, cosmídios, e fagemídios para clonagem em Escherichia coli. Cromossomas artificiais: PACs, BACs e YACs. Vetores de origem viral utilizados em células eucarióticas. Sistemas físicos e químicos de introdução de DNA em células procarióticas e eucarióticas: transformação, transdução, transfeção, eletroporação, microinjeção, bombardeamento de partículas.

Tipo de hospedeiros: hospedeiros procarióticos e principais hospedeiros eucarióticos (células animais e vegetais, linhas celulares, culturas primárias e tecidos). Características das células hospedeiras de E. coli. Selecção e identificação de clones recombinantes: a utilização de substratos cromogénicos, a inactivação funcional, a complementação de mutações definidas. Análise das construções de moléculas de DNA recombinante – por análise de restrição e por PCR.