Técnicas imunológicas em investigação IV: Isolamento de populações linfoides e ensaios funcionais

20 Março 2023, 12:00 • Teresa Pais

Métodos para obter populações de linfócitos para estudos funcionais:

Isolamento de células mononucleares de sangue periférico de humanos por centrifugação num gradiente de Ficol

Isolamento de linfócitos de órgãos linfoides de ratinhos

Purificação de populações específicas de linfócitos por FACS ou por “magnetic-activated cell sorting” (MACS)

 

Métodos para estudar a resposta de linfócitos T in vitro

Estímulos policlonais- Concanavalina-A e fitohemaglutinina (PHA), anticorpos anti-CD3 e anti-CD28, superantigénios, PMA+Ionomicina; e estímulos específicos: péptidos

Avaliação da proliferação celular: Incorporação de timidia tritiada, BrDU, iodeto de propídio e CFSE

Avaliação da morte celular: Medição da atividade de caspase 3 e Tunel

Avaliação da produção de citocinas: Elisa e ELISPOT, marcação intracelular de citocinas e análise por citometria de fluxo

Estudo da especificidade de linfócitos T: tetrâmeros

Ensaio de citotoxicidade para avaliação da função de linfócitos T CD8+ citotóxicos.