Técnicas imunológicas em investigação IV: Isolamento de populações linfoides e ensaios funcionais
20 Março 2023, 09:00 • Teresa Pais
Métodos para obter populações de linfócitos para estudos funcionais:
Isolamento de células mononucleares de sangue periférico de humanos por centrifugação num gradiente de Ficol
Isolamento de linfócitos de órgãos linfoides de ratinhos
Purificação de populações específicas de linfócitos por FACS ou por “magnetic-activated cell sorting” (MACS)
Métodos para estudar a resposta de linfócitos T in vitro
Estímulos policlonais- Concanavalina-A e fitohemaglutinina (PHA), anticorpos anti-CD3 e anti-CD28, superantigénios, PMA+Ionomicina; e estímulos específicos: péptidos
Avaliação da proliferação celular: Incorporação de timidia tritiada, BrDU, iodeto de propídio e CFSE
Avaliação da morte celular: Medição da atividade de caspase 3 e Tunel
Avaliação da produção de citocinas: Elisa e ELISPOT, marcação intracelular de citocinas e análise por citometria de fluxo
Estudo da especificidade de linfócitos T: tetrâmeros
Ensaio de citotoxicidade para avaliação da função de linfócitos T CD8+ citotóxicos