Colheita, clarificação e titulação dos vírus produzidos em células Vero.

7 Novembro 2017, 18:00 • Maria Filomena Ribeiro Alcobia da Silva Trabucho Caeiro

Observação das culturas de células infetadas na aula anterior, entretanto com efeito citopático (ECP) total, e mantidas a 4ºC.

Colheita das suspensões virais e clarificação por centrifugação a baixa velocidade (3000 g).

Preparação de diluições seriadas das diferentes suspensões virais e início do procedimento de titulação em células Vero cultivadas em placas de 24 poços (P24).

P11

7 Novembro 2017, 18:00 • Lélia Chambel

Titulação de iridovírus (parte II): paragem da titulação.

Infeção de culturas celulares com iridovírus.

Titulação de iridovírus (parte II): procedimentos finais da paragem da titulação e coloração das células não infetadas. Contagem de placas virais e cálculo dos correspondentes títulos virais.

Produção e titulação do EMCV em células Vero

7 Novembro 2017, 17:00 • Maria Filomena Ribeiro Alcobia da Silva Trabucho Caeiro

Descrição e discussão dos procedimentos a desenvolver na aula prática, relativos à colheita e titulação dos vírus cuja produção foi iniciada na aula anterior.

Infeção de culturas celulares: observação e manuseamento

2 Novembro 2017, 18:00 • Maria Filomena Ribeiro Alcobia da Silva Trabucho Caeiro

Observação em microscópio de luz invertida, de culturas de células Vero infetadas com diferentes tipos de vírus (isolados de Iridoviridae e vírus da Encefalite murina - EMCV) e em diferentes etapas da infeção. Avaliação de diferentes tipos de efeito citopático.Infeção de culturas celulares com o EMCV, em câmara de fluxo laminar.

P10

2 Novembro 2017, 18:00 • Lélia Chambel

Titulação de iridovírus (parte I): diluições de suspensões virais e inoculação de culturas celulares com as diferentes diluições obtidas. Adição de meio de titulação.

Subcultura de células Vero (parte II). Contagem de células e cálculos de concentrações de células viáveis e inviáveis. Cálculo do número de células na cultura de partida.