Sumários
Microscopia de fluorescência.
25 Setembro 2023, 08:00 • Rita Zilhão
Microscopia de fluorescência. Diferentes técnicas de microscopia de fluorescência. Marcação fluorescente. Características, aplicações, vantagens e desvantagens da microscopia widefield, confocal, de deconvoluntion, de iluminação estruturada (SIM), de Lattice lightsheet (LLSM). Microscopia de fluorescência por multifotões. Microscopia intravital. TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy). A evolução na resolução da microscopia de fluorescência: STORM (Stochastic optical reconstruction microscopy ) de super-resolução. Dual color STORM. Zeiss Airyscan. Aplicações: Live cell imaging, FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP (Fluorescence Loss In Photobleaching), FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer), FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).
Imunocitoquímica, imunohostoquímica
22 Setembro 2023, 09:00 • Rita Zilhão
Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.
Imunocitoquímica, imunohostoquímica.
22 Setembro 2023, 08:00 • Rita Zilhão
Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.
Continuação do PCR em tempo real
20 Setembro 2023, 09:00 • Rita Zilhão
Continuação do PCR em tempo real: O fenómeno de FRET. Sondas de hidrólise (ex. Taqman), sondas estruturadas (ex. Molecular Beacon), sondas de hibridação (ex. Light Cycler). Vantagens e desvantagens dos diferentes sistemas de deteção.
A escolha dos controlos positivos e negativos. A escolha do controlo endógeno. Ensaios de validação, cálculo da eficiência e curvas padrão. Interpretação dos resultados de qPCR e quantificação. Planeamento de um ensaio de PCR.
Interrupção aula devido a alarme de fogo.
Continuação do PCR em tempo real
20 Setembro 2023, 08:00 • Rita Zilhão
Continuação do PCR em tempo real: O fenómeno de FRET. Sondas de hidrólise (ex. Taqman), sondas estruturadas (ex. Molecular Beacon), sondas de hibridação (ex. Light Cycler). Vantagens e desvantagens dos diferentes sistemas de deteção.
A escolha dos controlos positivos e negativos. A escolha do controlo endógeno. Ensaios de validação, cálculo da eficiência e curvas padrão. Interpretação dos resultados de qPCR e quantificação. Planeamento de um ensaio de PCR.
Interrupção aula devido a alarme de fogo.