Citometria de fluxo

7 Outubro 2016, 08:00 • Rita Zilhão

Citometria de fluxo. O que é a citometria de fluxo, como se mede. Princípios e vantagens da citometria. Diferentes citómetros. Componentes do citómetro. Sistema de fluidos, sistema óptico e sistema electrónico. A importância do ponto de interrogação e das diferentes presses dos fluidos. Noção da hidrodinâmica da focagem.  Os lasers e os seus múltiplos sistemas. Medição de luz dispersa (SSC e FSC) e de fluorescência. Os filtros ópticos. Os parâmetros electrónicos de detecção. A discriminação dos doublets. O estabelecimento do threshold. Aquisição de dados e processamento. O que se detecta e como: histogramas, dots plots, contour plots. O gating. O que se mede e como se reportam os dados obtidos. Esquema global de uma experiência de citometria e o que em cada passo está envolvido: 1- Pergunta biológica; 2- Conhecimento do aparelho; 3- Seleção dos reagentes (ex. escolha dos fluorocromos adequados e de anticorpos) e controlos; 4- Optimização do protocolo (ex. Concentração de células); 5- Configuração do instrumento; 6- Aquisição das amostras e controlos; 7- Análise (fontes de variabilidade e controlos); 8- Publicação (imagens e materiais e métodos).