Sistema sensorial: comportamento de evasão à luz (II) e Neurodegeneração (I)
3 Abril 2023, 10:00 • João Picão Osório
Sistema sensorial: comportamento de evasão à luz (II) e Neurodegeneração (I)
Aula composta por duas partes: 1) a 2a parte da aula V « Sistema sensorial : comportamento de evasão à luz (II) » iniciada no dia 27/03/2023 ; e 2) A introdução ao bloco « Neurodegeneração ». Um bloco de múltiplas aulas.
Parte 1 : Sistema sensorial: comportamento de evasão à luz (II)
Na aula passada manipulamos diferentes vias sensoriais da larva da Drosophila melanogaster que são sensíveis à luz: 1) a via do órgão de Bowlig (utilizando sGMR-GAL4), 2) a via das células multidendríticas sensoriais ppk (utilizando ppk-GAL4), e 3) a via das células sensoriais multidendríticas traqueais v’td2-Dp7 (utilizando uma mutação, ilp7[1]). Utilizamos UAS-rpr para eliminar as células por apoptose. Utilizamos também Kir2.1 e a toxina do tétano (TxT) para silenciar os neurónios por hiperpolarização ou por bloqueio da via da exocitose, respetivamente. Quantificamos a preferência das larvas por escuridão ou luz ambiente após 10 min num ensaio simples de opção. As larvas foram condicionadas por pelo menos 5 min no escuro antes do ensaio. Nesta aula analisamos os resultados separados por grupos e comparamos os resultados com resultados de outras publicações. Após a discussão dos resultados na aula os alunos receberam um questionário com 5 perguntas em forma de peer-review sobre os experimentos realizados. Esse foi o relatório desta aula.
Parte 2: Neurodegeneração (I)
Na segunda etapa desta aula foi feita primeiro a introdução e discussão interativa sobre os temas dos trabalhos a serem apresentados na última aula. Em seguida foi feita a introdução ao tema das aulas seguintes “Neurodegeneração: indução da doença de Parkinson em Drosophila melanogaster”, com o enfoque na doença de Parkinson e o papel da alfa-sinucleína nesta doença.
Finalmente, nesta primeira aula os alunos fizeram os cruzamentos com moscas transgénicas para estudarem um modelo da “doença de Parkinson” na descendência da mosca. Para tal, utilizaram o sistema GAL4/UAS para expressar a alfa-sinucleína humana em todos os neurónios da mosca com as seguintes linhas transgénicas:
- Driver pan-neuronal 57C10-GAL4 : w111
- Driver vazio como controlo pBDP-GAL4: w1118; ; P{pBDP-GAL4}attP2
- α-sinucleína humana UAS-α-Syn: w[1118];; P{w[+mC]=UAS-SNCA.J}7/TM3, Sb[1]
Procedimento
Cada grupo efectuou dois cruzamentos por cada driver/α-Syn num total de 4 cruzamentos.
1) Combinaram os dois tubos de virgens 57C10-GAL4 com os dois tubos de machos UAS-α-Syn;
2) Combinaram dois tubos de virgens pBp-GAL4 com dois tubos de machos UAS-α-Syn;
3) Depois de combinarem as moscas no cruzamento, identificaram os tubos com os respetivos genótipos parentais, data, o grupo, e a turma.
Esta aula foi ministrada pelos professores Alisson Gontijo e João Picão