Aula 2
22 Março 2022, 13:00 • Solveig Thorsteinsdottir
Fertilização o desenvolvimento precoce no ouriço-do-mar ao vivo.
Objectivo 1: Observação de oócitos e espermatozóides
Objectivo 2: Observação da fertilização.
Objectivo 3: Observação das modificações que ocorrem ao nível do núcleo e citoplasma até a primeira divisão mitotica. Observação da segunda clivagem. Opcional: obervação de gastrulas e larvas pluteus no dia seguinte.
Objectivo 4: Executar uma experiência que testa o efeito da concentração dos espermatozóides no (1) sucesso da fertilização e (2) a incidência de polispermia. Elaboração de um gráfico com os resultados obtidos.
Protocolo da aula:
Observação de oócitos:
· Colocar uma gota de oócitos em água do mar numa lâmina e observar no microscópio (obj. 10x - não usar a objectiva de 40x!!). Identificar oócitos maduros e imaturos.
· Adicionar uma gota muito pequena de tinta de China e misturar com um palito. Observar a geleia.
Observação de espermatozóides:
(só podem usar a objetiva de 40x COM LAMELA - a água do mar destrói objectivas!).
· Preparar sémen diluído em água do mar. Observar com a objetiva de 10x sem lamela e depois colocar uma lamela e observar com a objetiva de 40x
Fertilização:
· Preparar uma caixa de Petri com oócitos em água do mar. Colocar uma gota de oócitos numa lâmina, colocar no microscópio e focar com a objetiva de 10x.
· A docente adiciona esperma diluído à caixa de Petri (vai ser usado para observar as fases de clivagem) e coloca uma gota de esperma na lâmina.
· Juntar a gota de esperma com a gota de oócitos usando um palito. Observar a fertilização.
Clivagem:
· Retirar uma gota de embriões em clivagem da caixa de Petri e observar sem lamela com a objetiva de 10x. Observar a alteração ao nível do núcleo e a formação do fuso mitótico.Observar a 1ª divisão mitótica (±40-50* min após a fertilização), a 2ª divisão mitótica (10-15* min após a 1ª) e a 3ª divisão mitótica (10-15* min após a 2ª). *depende da temperatura da sala