Cont. de variantes da técnica de PCR e suas aplicações. 6. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas e 7. Análise dos genes clonados e dos seus produtos

26 Março 2021, 08:00 • Rita Zilhão

Cont. de variantes da técnica de PCR e suas aplicações: Nested-PCR, sistema ARMS, DOP-PCR. Técnicas de mutagénese dirigida baseada em PCR (PCR invertido e SOE-PCR (Splicing by overlapping extension).

6. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas

O que são técnicas de hibridação de ácidos nucleicos e o seu fundamento. Origem e caracterização das sondas de hibridação de ácidos nucleicos. Os diferentes tipos de sondas. Sondas homólogas, heterólogas e degeneradas. Condições de hibridação. Temperatura de fusão/desnaturação (Tm – melting temperature). 

Sistemas de marcação: marcação radioactiva e não-radioactiva de DNA. Noções muito gerais sobre marcação de DNA por nick translation, por primers aleatórios e de extremidades 5’ e 3’ do DNA. Como se obtêm sondas de RNA (ribossondas).

7. Análise dos genes clonados e dos seus produtos

Hibridação Southern e algumas aplicações (ex. DNA fingerprinting).