Modelos experimentais em Imunologia

27 Março 2023, 12:00 • Teresa Pais

Primatas não humanos, Ratinhos inbread, Ratinhos geneticamente manipulados (transgénicos, knock-out, knock-in, animais humanizados).

Análise do repertório de linfócitos B e T por sequenciação.

Teste acerca dos conteúdos lecionados nas TP4 e TP5.

Modelos experimentais em Imunologia

27 Março 2023, 12:00 • Iris Caramalho

Processamento e apresentação antigénica a linfócitos T

27 Março 2023, 11:00 • Iris Caramalho

Características do reconhecimento de antigénios por linfócitos T

Modelo para o reconhecimento de complexos MHC-péptido pelo TCR

Funções das células apresentadoras de antigénio

Captura e apresentação de antigénio

Papel das células dendríticas na captura e apresentação antigénica

Origem dos péptidos apresentados em MHV classe I e II

Distribuição da expressão de moléculas de MHC classe I e II

Papel do IFN-gama no aumento de expressão de MHC classe II

Estrutura das moléculas de MHC classe I e II

Geração de diversidade BCR e TCR

21 Março 2023, 12:00 • Margarida Henriques da Gama Carvalho

As respostas humoral e celular dependem de receptores de antigénio. Os TCRs têm uma estrutura semelhante aos anticorpos. As imunoglobulinas apresentam várias estruturas possíveis. Os “genes” das imunoglobulinas: segmentos génicos da região constante e variáveis, rearranjo dos genes das cadeias leves e rearranjo dos genes das cadeias pesadas. Rearranjo dos receptores de antigénio. Mecanismos da recombinação V(D)J. Non-homologous end joining (NHEJ). Geração de diversidade: Adições P e Adições N, Flexibilidade Juncional. Hipermutação somática: evolução da afinidade durante o processo de ativação. Expressão da cadeia pesada μ ou δ (IgM vs IgD) e Class-switch recombination durante a ativação.

Técnicas imunológicas em investigação IV: Isolamento de populações linfoides e ensaios funcionais

20 Março 2023, 12:00 • Teresa Pais

Métodos para obter populações de linfócitos para estudos funcionais:

Isolamento de células mononucleares de sangue periférico de humanos por centrifugação num gradiente de Ficol

Isolamento de linfócitos de órgãos linfoides de ratinhos

Purificação de populações específicas de linfócitos por FACS ou por “magnetic-activated cell sorting” (MACS)

Métodos para estudar a resposta de linfócitos T in vitro

Estímulos policlonais- Concanavalina-A e fitohemaglutinina (PHA), anticorpos anti-CD3 e anti-CD28, superantigénios, PMA+Ionomicina; e estímulos específicos: péptidos

Avaliação da proliferação celular: Incorporação de timidia tritiada, BrDU, iodeto de propídio e CFSE

Avaliação da morte celular: Medição da atividade de caspase 3 e Tunel

Avaliação da produção de citocinas: Elisa e ELISPOT, marcação intracelular de citocinas e análise por citometria de fluxo

Estudo da especificidade de linfócitos T: tetrâmeros

Ensaio de citotoxicidade para avaliação da função de linfócitos T CD8+ citotóxicos.