Citometria de fluxo

28 Setembro 2020, 10:00 • Rita Zilhão

Aula em zoom. Citometria de fluxo. Definição e fundamentos da citometria de fluxo: o que é a citometria de fluxo e como medi-la. Para que serve, vantagens e os diferentes citómetros. Descrição dos componentes do citómetro de fluxo: fluídica (ponto de interrogação, focagem hidrodinâmica, pressão diferencial (“flow rate”); óptica (sistema de lasers, emissão de luz - “foward scatter” (FSC) e “side scatter” (SSC) -, emissão de fluorescência – conjugar os diferentes fluorocromos, fluorescence spectra viwers, filtros; a eletrónica – detetores e processamento de sinal, como se mede, a importância da discriminação de dupletos; a digitilização e a apresentação dos resultados (histogramas, contour and density plots). Como preparar uma experiência de citometria de fluxo: a pergunta biológica, conhecer o citómetro que se usa, selecionar os reagentes (princípios e regras na escolha dos fluorocromos, a densidade antigénica, os anticorpos marcados em tandem, e preparar a amostra, controlos (biológicos, de qualidade, de coloração, de “gating”), optimização, configurar o instrumento (controlos de compensação e FMO) e a aquisição da amostra, a análise (representação dos resultados e “gating”) e estatística dos resultados (Mean e “Median fluorescence intensity” (MFI), softwares de tratamento de dados) a publicação dos resultados (Myflowcyt). Fontes úteis de consulta e estudo.

Citometria de fluxo

28 Setembro 2020, 09:00 • Rita Zilhão

Aula em zoom. Citometria de fluxo. Definição e fundamentos da citometria de fluxo: o que é a citometria de fluxo e como medi-la. Para que serve, vantagens e os diferentes citómetros. Descrição dos componentes do citómetro de fluxo: fluídica (ponto de interrogação, focagem hidrodinâmica, pressão diferencial (“flow rate”); óptica (sistema de lasers, emissão de luz - “foward scatter” (FSC) e “side scatter” (SSC) -, emissão de fluorescência – conjugar os diferentes fluorocromos, fluorescence spectra viwers, filtros; a eletrónica – detetores e processamento de sinal, como se mede, a importância da discriminação de dupletos; a digitilização e a apresentação dos resultados (histogramas, contour and density plots). Como preparar uma experiência de citometria de fluxo: a pergunta biológica, conhecer o citómetro que se usa, selecionar os reagentes (princípios e regras na escolha dos fluorocromos, a densidade antigénica, os anticorpos marcados em tandem, e preparar a amostra, controlos (biológicos, de qualidade, de coloração, de “gating”), optimização, configurar o instrumento (controlos de compensação e FMO) e a aquisição da amostra, a análise (representação dos resultados e “gating”) e estatística dos resultados (Mean e “Median fluorescence intensity” (MFI), softwares de tratamento de dados) a publicação dos resultados (Myflowcyt). Fontes úteis de consulta e estudo.

Como escrever um artigo científico

23 Setembro 2020, 10:00 • Rita Zilhão

Aula em zoom e presencial.  Como escrever um artigo científico. O que é um artigo científico? Porquê publicar?

Definição de artigo científico. A decisão de publicar? O que é que se publica? Quando se publica? O que pretendemos ao publicar? Depois de escrito, como é que um artigo é publicado. Em que revista publicar: tipo de revista, actualidade do tema/impacto da investigação, factor de impacto das revistas, open access vs paid access, os custos da publicação. Que tipo de manuscrito: artigo, carta, pequena comunicação, artigo de revisão. A escrita do manuscrito: pontos importantes a respeitar e o que não fazer. Lista de autores. As instruções aos autores. A estrutura do manuscrito (título, sumário, introdução, materiais e métodos, resultados, discussão, tabelas e figuras, referências, cover letter) e o que se espera de cada uma destas partes. O léxico e a fluência da escrita. A revisão do artigo e a sugestão dos reviewers.

Como escrever um artigo científico

23 Setembro 2020, 09:00 • Rita Zilhão

Aula em zoom e presencial.  Como escrever um artigo científico. O que é um artigo científico? Porquê publicar?

Definição de artigo científico. A decisão de publicar? O que é que se publica? Quando se publica? O que pretendemos ao publicar? Depois de escrito, como é que um artigo é publicado. Em que revista publicar: tipo de revista, actualidade do tema/impacto da investigação, factor de impacto das revistas, open access vs paid access, os custos da publicação. Que tipo de manuscrito: artigo, carta, pequena comunicação, artigo de revisão. A escrita do manuscrito: pontos importantes a respeitar e o que não fazer. Lista de autores. As instruções aos autores. A estrutura do manuscrito (título, sumário, introdução, materiais e métodos, resultados, discussão, tabelas e figuras, referências, cover letter) e o que se espera de cada uma destas partes. O léxico e a fluência da escrita. A revisão do artigo e a sugestão dos reviewers.

Microscopia de fluorescência

21 Setembro 2020, 10:00 • Rita Zilhão

Aula em zoom e presencial.  Microscopia de fluorescência. Diferentes técnicas de microscopia de fluorescência. Marcação fluorescente. Características, aplicações, vantagens e desvantagens da microscopia widefield, confocal, de deconvoluntion, de iluminação estruturada (SIM), de Lattice lightsheet (LLSM). Microscopia de fluorescência por multifotões. Microscopia intravital. TIRFM ( Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy). A evolução na resolução da microscopia de fluorescência: STORM ( Stochastic optical reconstruction microscopy ) de super-resolução. Dual color STORM. Zeiss Airyscan. Aplicações: Live cell imaging, FRAP ( Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP ( Fluorescence Loss In Photobleaching), FRET ( Fluorescence Resonance Energy Transfer), FLIM ( Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).