Sumários
Microscopia de fluorescência
21 Setembro 2020, 09:00 • Rita Zilhão
Aula em zoom e presencial. Microscopia de fluorescência. Diferentes técnicas de microscopia de fluorescência. Marcação fluorescente. Características, aplicações, vantagens e desvantagens da microscopia widefield, confocal, de deconvoluntion, de iluminação estruturada (SIM), de Lattice lightsheet (LLSM). Microscopia de fluorescência por multifotões. Microscopia intravital. TIRFM ( Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy). A evolução na resolução da microscopia de fluorescência: STORM ( Stochastic optical reconstruction microscopy ) de super-resolução. Dual color STORM. Zeiss Airyscan. Aplicações: Live cell imaging, FRAP ( Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP ( Fluorescence Loss In Photobleaching), FRET ( Fluorescence Resonance Energy Transfer), FLIM ( Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).
Imunocitoquímica, imunohostoquímica.
18 Setembro 2020, 09:00 • Rita Zilhão
Aula em zoom e presencial. Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.
Imunocitoquímica, imunohostoquímica.
18 Setembro 2020, 08:00 • Rita Zilhão
Aula em zoom e presencial. Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.
Cont. PCR em tempo real
16 Setembro 2020, 10:00 • Rita Zilhão
Aula em zoom e presencial. Continuação do PCR em tempo real: A escolha dos controlos positivos e negativos. A escolha do controlo endógeno. Ensaios de validação, cálculo da eficiência e curvas padrão. Interpretação dos resultados de qPCR e quantificação. Planeamento de um ensaio de PCR. Métodos de quantificação – quantificação absoluta (método da curva padrão), quantificação relativa (método da curva padrão, delta delta Ct e Pfaffl). PCR qualitativo – discriminação alélica, a importância da curva de fusão (melting curve). Aplicações do qPCR.
Cont. PCR em tempo real
16 Setembro 2020, 09:00 • Rita Zilhão
Aula em zoom e presencial. Continuação do PCR em tempo real: A escolha dos controlos positivos e negativos. A escolha do controlo endógeno. Ensaios de validação, cálculo da eficiência e curvas padrão. Interpretação dos resultados de qPCR e quantificação. Planeamento de um ensaio de PCR. Métodos de quantificação – quantificação absoluta (método da curva padrão), quantificação relativa (método da curva padrão, delta delta Ct e Pfaffl). PCR qualitativo – discriminação alélica, a importância da curva de fusão (melting curve). Aplicações do qPCR.