Sumários

27 Novembro 2024, 16:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Princípios gerais de desenvolvimento de um esquema de purificação de proteínas tradicional (I):

• Grau de pureza final requerido versus objetivo da purificação.

• Otimização do esquema geral de uma purificação tradicional. Critérios de escolha do material fonte.

• Fracionamento por precipitação: técnica de salting out e precipitação isoelétrica. Fracionamentos cromatográficos.

• Monitorização da purificação realizada: doseamento de proteína total e métodos de identificação específicos da proteína a purificar.

22 Novembro 2024, 11:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Resolução da série de problemas VI

21 Novembro 2024, 14:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Métodos de revelação dos géis

• Ligação de corantes/sondas in situ

• Autoradiografia

• Análise enzimática in situ

• Western blot

Focagem isoelétrica

• Separação eletroforética usando um gradiente de pH

• Uso de anfólitos versus gradientes de pH imobilizados

• Determinação do pI de uma proteína

• Avaliação da micro-heterogeneidade de uma proteína

Técnicas eletroforéticas 2D

• 2D-PAGE

2D-DIGE

20 Novembro 2024, 17:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Resolução da série de problemas VI

20 Novembro 2024, 16:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

SDS-PAGE

• Tratamento prévio da amostra > tampão de aplicação da amostra

• Como concentrar as amostras nos poços?

• Princípios da isotacoforese

• Sistema de tampão descontínuo

• SDS-PAGE

• A influência da %T do gel na separação: PAGE em gradiente de poro

• Uso de condições redutoras vs não redutoras

• Exemplos de aplicações da técnica de SDS-PAGE

• Determinação do grau de pureza/integridade de uma proteína

• Determinação da M_r de uma subunidade

Determinação da M_r de proteínas oligoméricas