Sumários
Imunocitoquímica III: Microscopía
16 Março 2022, 09:00 • Federico Herrera Garcia
Nesta última sessão, os estudantes tiveram de adquirir imagens suficientes para efectuarem uma análise quantitativa com o software gratuito ImageJ. Foi-lhes ensinado como utilizar o software do microscópio, e os princípios por detrás do microscópio. Os objectivos, as fontes de iluminação e o próprio microscópio foram descritos em pormenor. Tiraram fotografias de cada grupo experimental até obterem entre 50 e 100 células por condição experimental. Tiraram estas imagens numa caneta para análise de imagem mais tarde.
Simulação da via do NF-kB
11 Março 2022, 10:00 • Fernando Jose Nunes Antunes
Simulação de uma via do NF-kB
- Simulação e estudo mecanístico do efeito da duração do estímulo na ativação do NF-kB
- Simulação de "knock-outs" do IkBa e A20
- Estudo do efeito do quociente entre o volume do citosol e do núcleo na ativação do NF-kB
- Simulação da transfeção com IkBa e NF-kB
Imunocitoquímica II: Anticorpos Secundários
11 Março 2022, 08:00 • Federico Herrera Garcia
Nesta etapa, os alunos só tinham de adicionar os anticorpos secundários às amostras e incubá-las à temperatura ambiente e na escuridão durante 2 horas. Resumidamente, os anticorpos primários foram lavados com 3 lavagens com PBS durante 10 min cada, os anticorpos secundários numa solução de BSA 1% foram adicionados às amostras e, após 2 horas, os anticorpos secundários foram lavados com PBS 3 vezes durante 10 min cada. As lamelas de vidro com as células foram então montadas em lâminas de vidro com meio de montagem, e seladas com verniz de unhas. Durante os tempos de incubação, expliquei em detalhe os princípios subjacentes a estas etapas e antecipei o trabalho que faríamos no microscópio no dia seguinte.
Imunocitoquímica II: Anticorpos Secundários
10 Março 2022, 14:00 • Federico Herrera Garcia
Nesta etapa, os alunos só tinham de adicionar os anticorpos secundários às amostras e incubá-las à temperatura ambiente e na escuridão durante 2 horas. Resumidamente, os anticorpos primários foram lavados com 3 lavagens com PBS durante 10 min cada, os anticorpos secundários numa solução de BSA 1% foram adicionados às amostras e, após 2 horas, os anticorpos secundários foram lavados com PBS 3 vezes durante 10 min cada. As lamelas de vidro com as células foram então montadas em lâminas de vidro com meio de montagem, e seladas com verniz de unhas. Durante os tempos de incubação, expliquei em detalhe os princípios subjacentes a estas etapas e antecipei o trabalho que faríamos no microscópio no dia seguinte.
Simulação da via do NF-kB
10 Março 2022, 10:00 • Fernando Jose Nunes Antunes
Simulação da via do NF-kB
- Introdução ao PLAS
- Montagem e análise de um modelo minimal do NF-kB
- Análise de um modelo complexo do NF-kB
- Construção do esquema reacional
- Determinação dos tempos de resposta