Sumários
Simulação da via do NF-kB
3 Março 2022, 10:00 • Fernando Jose Nunes Antunes
Simulação da via do NF-kB
- Introdução ao PLAS
- Montagem e análise de um modelo minimal do NF-kB
- Análise de um modelo complexo do NF-kB
- Construção do esquema reacional
- Determinação dos tempos de resposta
Western Blot
3 Março 2022, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da localização celular do factor NF-kB em células HeLa estimuladas por TNFalpha - parte II.
Western Blot
2 Março 2022, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da localização celular do factor NF-kB em células HeLa estimuladas por TNFalpha - parte I.
Imunocitoquímica I: Fixação, permeabilização, bloqueio e anticorpo primário
2 Março 2022, 09:00 • Federico Herrera Garcia
Após uma breve introdução ao método de imunocitoquímica, ao protocolo e ao plano das aulas práticas, os alunos trataram as células HeLa com TNFalpha durante 15 a 120 minutos. Depois, fixaram células com metanol gelado a -20C durante 10 minutos, lavaram o excesso com PBS (3 vezes x 10 min cada) e permeabilizaram com Triton X-100 0,1% à temperatura ambiente durante 10 minutos. As amostras foram lavadas 3 vezes x 10 min cada com PBS e as amostras foram bloqueadas com Albumina de Soro Bovino a 5% durante 1 hora à temperatura ambiente. Depois, os anticorpos primários contra NFkB e STAT3 foram adicionados às amostras e incubados a 4C durante a noite. Durante os tempos de incubação, expliquei mais detalhadamente os princípios subjacentes a cada etapa do protocolo, e fiz um lembrete de como e quando a etapa seguinte deveria ser levada a cabo.
Introdução á imunocitoquímica
25 Fevereiro 2022, 08:00 • Federico Herrera Garcia
Esta aula foi preparada para os estudantes compreender os princípios da imunocitoquímica. Analisei o protocolo e expliquei os princípios por detrás de cada passo, e forneci materiais em linha adicionais para estudar mais a fundo. Os princípios de fluorescência, comprimentos de onda e propriedades óticas dos fluorocromos foram relembrados.
Recursos:
Methods based on antibodies (documents for reading):
https://www.abcam.com/protocols/antibody-methods-and-techniques
https://link.springer.com/content/pdf/10.1007%2F0-387-22845-4_4.pdf
Immunocytochemistry vs Immunohistochemistry:
https://en.wikipedia.org/wiki/Immunocytochemistry
Secondary antibodies (Thermo Fisher)(1:20 min):
Immunocytochemistry (plus explicações de monoclonal vs polyclonal antibodies)(12:28 min):
Immunohistochemistry (also valid for Immunocytochemistry)(5:30 min): https://youtu.be/zO70nrWcAyk
Indirect Immunofluorescence (applicable to ICC/IHC and ELISA)(from min 4:45 to min 12:00): https://youtu.be/mvI257AbDOE
Frank Lectures. A little robotic, and sometimes redundant, but illustrative:
Primary and secondary antibodies (6:48): https://youtu.be/qQ0BaZ83ZtY