Tutorial Analise de Imagens ImageJ BEIV

25 Fevereiro 2020, 15:31 • Federico Herrera Garcia

Boa tarde, alunos- Já estão disponíveis no Moodle o protocolo para o analise de imagens da disciplina BEIV, junto com 3 imagens para vocês poderem praticar se quiserem. As imagens são originais, obtidas no nosso laboratório de precursores neurais de ratinho diferenciados a astroglia. Têm dois canais: o verde (citoesqueleto, canal 1) e o azul (nucleos, canal 2). Trata-se de utilizar o canal azul (Hoechst, nucleos) para definir a área onde queremos medir a fluorescência nos otros canais (NFkB, STAT3). Feito ao longo do tempo, podremos ter uma medida quantitativa da migração do fator de transcripção NFkB ao núcleo das células HeLa apois do estímulo com TNFalpha. Isto é algo difícil de fazer por outros métodos, e da informação relevante sobre a dinámica celular em células íntegras (ainda que mortas e fixadas neste caso). Com células vivas é igualmente possível, ainda que os métodos são diferentes. Não conseguimos utilizar anticorpos, porque são demasiado grandes para atravessar a membrana celular, e então utilizamos estratégias genéticas (transfeção com plasmidios e proteinas fluorescentes, por exemplo).

Cumprimentos,