Anisotropia de fluorescência

15 Outubro 2019, 09:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Radiação linearmente polarizada. Momentos de transição da absorção e efeito de foto-seleção.

Polarização e anisotropia de fluorescência: definições e determinação experimental.

Principais causas da despolarização da emissão de fluorescência. Anisotropia fundamental, r₀.

Medidas de anisotropia resolvidas no tempo. Derivação da equação de Perrin. Parâmetros que influenciam o tempo de correlação rotacional de uma espécie fluorescente. Lei da aditividade das anisotropias.

FRET

8 Outubro 2019, 12:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Tipos de transferência de energia de excitação: transferência radiativa e não radiativa; hetero- e homotransferência.

Transferência de energia por ressonância (RET): mecanismo de Förster (interacção dipolar), dependência da constante de velocidade de transferência de energia com a distância entre D e A  e raio de Förster.

Medição experimental da eficiência de transferência de energia: medidas em estado estacionário (intensidade de fluorescência do dador) e resolvidas no tempo (tempo de vida do dador); emissão sensibilizada do aceitante (intensidade de fluorescência do aceitante).

Determinação de distância única dador-aceitante por medidas de transferência de energia – escolha do par de Förster a usar.

Série de problemas II

8 Outubro 2019, 10:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Resolução da 2ª série de problemas.

Extinção de fluorescência (quenching) II

8 Outubro 2019, 09:30 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Quenching estático (modelo da esfera de acção e formação de complexos no estado fundamental).

Sistemas complexos: 

(i) extinção dinâmica e estática em simultâneo;

(ii) sistemas heterogéneos. Gráfico de Lehrer.

Quenching I

1 Outubro 2019, 12:00 • Ana Isabel Abrantes Coutinho

Medidas de fluorescência resolvidas no tempo.

Relação entre as medidas de fluorescência em estado estacionário e resolvidas no tempo.

Realização de medidas de intensidade de fluorescência resolvidas no tempo, I(t):  Fluorimetria pulsada – técnica de cronometragem do fotão único (SPT)

Cinética de emissão de fluorescência: decaimento mono-exponencial e tempo de vida do estado excitado.

Decaimentos de intensidade de fluorescência multi-exponenciais.

Introdução à extinção de fluorescência (quenching).

Quenching dinâmico (extinção de fluorescência colisional).  Dedução da equação de Stern-Volmer. Significado físico da constante de Stern-Volmer. Determinação da eficiência de quenching.