Sumários
Fim do tema 3. e 4. Clonagem de expressão
13 Março 2025, 08:00 • Rita Zilhão
Sistemas físicos e químicos de introdução de DNA em células procarióticas e eucarióticas: transformação, transdução, transfeção, eletroporação, microinjeção, bombardeamento de partículas.
Tipo de hospedeiros: hospedeiros procarióticos e principais hospedeiros eucarióticos (células animais e vegetais, linhas celulares, culturas primárias e tecidos). Características das células hospedeiras de E. coli. Importância dos sistemas de modificação restrição na clonagem molecular Seleção e identificação de clones recombinantes: alfa-complementação.
Seleção e identificação de clones recombinantes: a utilização de substratos cromogénicos, a inativação funcional. Análise das construções de moléculas de DNA recombinante – por análise de restrição e por PCR.
4. Clonagem de expressão
Sistemas de expressão homóloga e heteróloga de genes. Vantagens e desvantagens da expressão heteróloga em E. coli. Configuração de vetores procarióticos de expressão. Sistemas de expressão induzíveis (Plac, PT7; ex. pET system). Elevada eficiência de tradução.