Sumários

Esta turma não existiu. Tinha 1 aluno inscrito que foi transferido para outra turma

7 Março 2025, 14:00 Rita Zilhão

Esta turma não existiu. Tinha 1 aluno inscrito que foi transferido para outra turma


cont tema das PLs

7 Março 2025, 10:30 Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).


3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

6 Março 2025, 08:00 Rita Zilhão

3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

Clonagem molecular: significado, objetivos e etapas. O papel dos ácidos nucleicos na clonagem molecular. Construção de moléculas de DNA recombinante. Preparação de DNA vetor e DNA dador. Estratégias de ligação de DNA vetor e DNA dador (ligases de DNA). Clonagem dirigida e clonagem não dirigida.

Métodos de produção de fragmentos de DNA e de modificação de extremidades (DNA polimerases, fosfatases de DNA, transferase terminal; adição de linkers e adaptadores).


A variedade de sistemas de clonagem. Noção de sistema vetor/hospedeiro. Características fundamentais dos vetores de clonagem: origem de replicação, marca de seleção, “polylinker”. Vetores shuttle.

Vetores de clonagem: plasmídeos, fagos, cosmídios, e fagemídios para clonagem em Escherichia coli. Cromossomas artificiais: PACs, BACs e YACs. Vetores de origem viral utilizados em células eucarióticas (Lentivirus, Adenovirus e Adeno-associated vírus).

 


Esta turma não existiu. Tinha 1 aluno inscrito que foi transferido para outra turma

28 Fevereiro 2025, 14:00 Rita Zilhão

Esta turma não existiu. Tinha 1 aluno inscrito que foi transferido para outra turma


1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

28 Fevereiro 2025, 10:30 Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão 

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar


Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.