2. Manipulação dos ácidos nucleicos: enzimologia, isolamento, quantificação e marcação

27 Fevereiro 2025, 08:00 • Rita Zilhão

2. Manipulação dos ácidos nucleicos: enzimologia, isolamento, quantificação e marcação

Breve resumo histórico do desenvolvimento da clonagem molecular. Noção de clonagem molecular e de clone molecular.

Enzimologia do DNA recombinante. Enzimas de restrição. Enzimas de restrição de tipo II. O que são isoesquizómeros. Importância dos sistemas de restrição/modificação em clonagem molecular.

Enzimas de modificação: nucleases, polimerases, fosfatases e cinases. DNA ligases.

Os conceitos abaixo, de manipulação de ácidos nucleicos (leccionados na disciplina de Fundamentos de Biologia Molecular, 2º ano TC), vão sendo revistos durante as as diferentes aulas práticas: propriedades físicas e químicas dos ácidos nucleicos e os seus métodos de visualização e quantificação. Fundamento de alguns processos de isolamento e purificação dos ácidos nucleicos. Métodos de quantificação dos ácidos nucleicos baseados na espectrofotometria e em matrizes (agarose e poliacrilamida) sujeitas a eletroforese. Mapa de restrição.

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1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

25 Fevereiro 2025, 09:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão 

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

 

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1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

24 Fevereiro 2025, 16:30 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão 

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

 

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1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

24 Fevereiro 2025, 13:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão 

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

 

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Na 1ª semana de aulas não decorrem PLs

21 Fevereiro 2025, 14:00 • Rita Zilhão

Na 1ª semana de aulas não decorrem PLs

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