6. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas; 7. Análise dos genes clonados e dos seus produtos (video conferência colibri.zoom)

17 Abril 2020, 08:00 • Rita Zilhão

6. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas

O que são técnicas de hibridação de ácidos nucleicos e o seu fundamento. Origem e caracterização das sondas de hibridação de ácidos nucleicos. Os diferentes tipos de sondas. Sondas homólogas, heterólogas e degeneradas. Condições de hibridação. Temperatura de fusão/desnaturação (Tm – melting temperature). 

Sistemas de marcação: marcação radioactiva e não-radioactiva de DNA. Noções muito gerais sobre marcação de DNA por nick translation, por primers aleatórios e de extremidades 5’ e 3’ do DNA. Como se obtêm sondas de RNA (ribossondas).

7. Análise dos genes clonados e dos seus produtos

Hibridação Southern. Hibridação dot-blot. Técnica de footprinting (DNase I). Deteção de interações DNA/proteína. Técnica de retardação em gel (EMSA – electrophoretic mobility shift assay) aplicada ao DNA e RNA.

Fundamento das técnicas de análise de RNA e suas aplicações: Extracção e purificação do RNA. Eletroforese de RNAs. Hibridação Northern. Hibridação dot-blot. Mapeamento das extremidades 5' e 3' dos transcritos: técnicas de 5’-RACE e 3’-RACE. Hibridação in situ.

PL transformada em TP (3) (video conferência colibri.zoom)

7 Abril 2020, 17:00 • Rita Zilhão

PL transformada em TP (3) (video conferência colibri.zoom)

Clonagem num vector de fusão traducional para detecção dos sinais de transcrição e de tradução de um gene em Escherichia coli

Explicação dos fundamentos dos protocolos envolvidos na transformação bacteriana (preparação de caixas de meio selectivo, preparação de células competentes e transformação bacteriana)

Resolução de problemas de sistemas de vector hospedeiro

PL transformada em TP (3) (video conferência colibri.zoom)

7 Abril 2020, 09:00 • Rita Zilhão

PL transformada em TP (3) (video conferência colibri.zoom)

Clonagem num vector de fusão traducional para detecção dos sinais de transcrição e de tradução de um gene em Escherichia coli

Explicação dos fundamentos dos protocolos envolvidos na transformação bacteriana (preparação de caixas de meio selectivo, preparação de células competentes e transformação bacteriana)

Resolução de problemas de sistemas de vector hospedeiro

PL transformada em TP (3) (video conferência colibri.zoom)

6 Abril 2020, 12:30 • Rita Zilhão

PL transformada em TP (3) (video conferência colibri.zoom)

Clonagem num vector de fusão traducional para detecção dos sinais de transcrição e de tradução de um gene em Escherichia coli

Explicação dos fundamentos dos protocolos envolvidos na transformação bacteriana (preparação de caixas de meio selectivo, preparação de células competentes e transformação bacteriana)

Resolução de problemas de sistemas de vector hospedeiro

PL transformada em TP (2) (video conferência colibri.zoom)

3 Abril 2020, 14:00 • Rita Zilhão

PL transformada em TP (2)

Clonagem num vector de fusão traducional para detecção dos sinais de transcrição e de tradução de um gene em Escherichia coli

Explicação de como se estabelecem as condições de reacção de ligação e respectivos controlos.

Resolução de problemas de clonagem