Sumários
Microscopia de fluorescência
20 Setembro 2024, 08:00 • Rita Zilhão
Microscopia de fluorescência. Diferentes técnicas de microscopia de fluorescência. Marcação fluorescente. Características, aplicações, vantagens e desvantagens da microscopia widefield, confocal, de deconvoluntion, de iluminação estruturada (SIM), de Lattice lightsheet (LLSM). Microscopia de fluorescência por multifotões. Microscopia intravital. TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy). A evolução na resolução da microscopia de fluorescência: STORM (Stochastic optical reconstruction microscopy ) de super-resolução. Dual color STORM. Zeiss Airyscan. Aplicações: Live cell imaging, FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP (Fluorescence Loss In Photobleaching), FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer), FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).
Tecnologias utilizadas no estudo do RNA
18 Setembro 2024, 09:00 • Rita Zilhão
Tecnologias utilizadas no estudo do RNA: O que é o RNA e porque é importante estudar o RNA? Ex. RNA-based therapies, RNA-based vacines. Os diferentes tipos de RNA. Como trabalhar o RNA: cuidados, extração e purificação, síntese/transcrição in vitro. Metodologias e abordagens experimentais para responder a questões biológicas específicas que envolvam moléculas de RNA: localização in vivo (Fluorescence in situ hybridization (FISH), RNA-tagging system fused to fluorescent proteins (MS2-tagged RNA; life cells) ); análise de expressão génica (Northern blot, RT-PCR, Microarrays, RNA sequencing); interação RNA-RNA e RNA-proteínas (electrophoretic mobility shift assay (EMSA), super electrophoretic mobility assay, imunoprecipitação de RNA (RIP and CLIP) e o MS2-TRAP (MS2-tagged RNA affinity purification). Um exemplo experimental: análise da função do gene CsiA de Bacillus clostridium.
Tecnologias utilizadas no estudo do RNA
18 Setembro 2024, 08:00 • Rita Zilhão
Tecnologias utilizadas no estudo do RNA: O que é o RNA e porque é importante estudar o RNA? Ex. RNA-based therapies, RNA-based vacines. Os diferentes tipos de RNA. Como trabalhar o RNA: cuidados, extração e purificação, síntese/transcrição in vitro. Metodologias e abordagens experimentais para responder a questões biológicas específicas que envolvam moléculas de RNA: localização in vivo (Fluorescence in situ hybridization (FISH), RNA-tagging system fused to fluorescent proteins (MS2-tagged RNA; life cells) ); análise de expressão génica (Northern blot, RT-PCR, Microarrays, RNA sequencing); interação RNA-RNA e RNA-proteínas (electrophoretic mobility shift assay (EMSA), super electrophoretic mobility assay, imunoprecipitação de RNA (RIP and CLIP) e o MS2-TRAP (MS2-tagged RNA affinity purification). Um exemplo experimental: análise da função do gene CsiA de Bacillus clostridium.
Apresentação e explicação da organização da disciplina. Imunocitoquímica, imunohostoquímica.
16 Setembro 2024, 09:00 • Rita Zilhão
Apresentação e explicação da organização da disciplina.
Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.
Apresentação e explicação da organização da disciplina. Imunocitoquímica, imunohostoquímica.
16 Setembro 2024, 08:00 • Rita Zilhão
Apresentação e explicação da organização da disciplina.
Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.