Sumários

Citometria de fluxo

24 Setembro 2021, 08:00 • Rita Zilhão

Citometria de fluxo. Definição e fundamentos da citometria de fluxo: o que é a citometria de fluxo e como medi-la. Para que serve, vantagens e os diferentes citómetros. Descrição dos componentes do citómetro de fluxo: fluídica (ponto de interrogação, focagem hidrodinâmica, pressão diferencial (“flow rate”); óptica (sistema de lasers, emissão de luz - “foward scatter” (FSC) e “side scatter” (SSC) -, emissão de fluorescência – conjugar os diferentes fluorocromos, fluorescence spectra viwers, filtros; a eletrónica – detetores e processamento de sinal, como se mede, a importância da discriminação de dupletos; a digitilização e a apresentação dos resultados (histogramas, contour and density plots). Como preparar uma experiência de citometria de fluxo: a pergunta biológica, conhecer o citómetro que se usa, selecionar os reagentes (princípios e regras na escolha dos fluorocromos, a densidade antigénica, os anticorpos marcados em tandem, e preparar a amostra, controlos (biológicos, de qualidade, de coloração, de “gating”), optimização, configurar o instrumento (controlos de compensação e FMO) e a aquisição da amostra, a análise (representação dos resultados e “gating”) e estatística dos resultados (Mean e “Median fluorescence intensity” (MFI), softwares de tratamento de dados) a publicação dos resultados (Myflowcyt). Fontes úteis de consulta e estudo.

Tecnologias utilizadas no estudo do RNA

22 Setembro 2021, 09:00 • Rita Zilhão

Tecnologias utilizadas no estudo do RNA: Metodologias e abordagens experimentais onde as moléculas de RNA são utilizadas como ferramentas de base para responder a questões biológicas específicas. Os diferentes pipos de RNA. Técnicas bioquímicas clássicas: transcrição in vitro, electrophoretic mobility shift assay (EMSA) , super electrophoretic mobility assay, filter binding assay, nucleasse protection assay, run-on assay. Tecnologias mais actuais: imunoprecipitação de RNA (RIP) e RNA pull-down, RNA-assisted RNA chromatography. O processo biológico de RNA de interferência (RNAi). Mecanismo geral de RNAi. Tecnologia de RNAi – ferramentas e estratégias; análise funcional da acção de RNAi. Aplicações e exemplos da tecnologia de RNA

Tecnologias utilizadas no estudo do RNA

22 Setembro 2021, 08:00 • Rita Zilhão

Microscopia de fluorescência.

20 Setembro 2021, 10:00 • Rita Zilhão

Microscopia de fluorescência. Diferentes técnicas de microscopia de fluorescência. Marcação fluorescente. Características, aplicações, vantagens e desvantagens da microscopia widefield, confocal, de deconvoluntion, de iluminação estruturada (SIM), de Lattice lightsheet (LLSM). Microscopia de fluorescência por multifotões. Microscopia intravital. TIRFM ( Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy). A evolução na resolução da microscopia de fluorescência: STORM ( Stochastic optical reconstruction microscopy ) de super-resolução. Dual color STORM. Zeiss Airyscan. Aplicações: Live cell imaging, FRAP ( Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP ( Fluorescence Loss In Photobleaching), FRET ( Fluorescence Resonance Energy Transfer), FLIM ( Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).

Microscopia de fluorescência.

20 Setembro 2021, 09:00 • Rita Zilhão