Imunocitoquímica, imunohostoquímica.

17 Setembro 2021, 09:00 • Rita Zilhão

Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.

Imunocitoquímica, imunohostoquímica.

17 Setembro 2021, 08:00 • Rita Zilhão

Imunocitoquímica, imunohostoquímica. Reacção antigénio anticorpo. O tipo de amostras. Preparação das amostras: adesão, fixação, permeabilização, seccionamento, recuperação antigénios. Tipos de anticorpos. A escolha e a marcação dos anticorpos primários e secundários. Sistemas de marcação e deteção e amplificação de sinal. Processos de bloqueio. Montagem das amostras. Counterstaining. Análise por diferentes tipos de microscopia. Controlos positivos e negativos. Artefactos, problemas e soluções (ex. atividade cruzada de anticorpos e a utilização de anticorpos pré-adsorvidos), conselhos. Exemplos, aplicações e exercícios.

Continuação do PCR em tempo real

15 Setembro 2021, 09:00 • Rita Zilhão

Continuação do PCR em tempo real: A escolha dos controlos positivos e negativos. A escolha do controlo endógeno. Ensaios de validação, cálculo da eficiência e curvas padrão. Interpretação dos resultados de qPCR e quantificação. Planeamento de um ensaio de PCR. Métodos de quantificação – quantificação absoluta (método da curva padrão), quantificação relativa (método da curva padrão, delta delta Ct e Pfaffl). PCR qualitativo – discriminação alélica, a importância da curva de fusão ( melting curve). Aplicações do qPCR

Continuação do PCR em tempo real

15 Setembro 2021, 08:00 • Rita Zilhão

Continuação do PCR em tempo real: A escolha dos controlos positivos e negativos. A escolha do controlo endógeno. Ensaios de validação, cálculo da eficiência e curvas padrão. Interpretação dos resultados de qPCR e quantificação. Planeamento de um ensaio de PCR. Métodos de quantificação – quantificação absoluta (método da curva padrão), quantificação relativa (método da curva padrão, delta delta Ct e Pfaffl). PCR qualitativo – discriminação alélica, a importância da curva de fusão ( melting curve). Aplicações do qPCR

Apresentação e explicação da organização da disciplina. PCR em tempo real.

13 Setembro 2021, 10:00 • Rita Zilhão

Apresentação e explicação da organização da disciplina.

PCR em tempo real. Princípios do PCR em tempo real. O parâmetro de medição da fluorescência: Ct (threshold cycle).  Sistemas de deteção – compostos de ligação ao DNA não específicos, sondas específicas de sequências. O fenómeno de FRET. Sondas de hidrólise (ex. Taqman), sondas estruturadas (ex. Molecular Beacon), sondas de hibridação (ex. Light Cycler). Vantagens e desvantagens dos diferentes sistemas de deteção