Sumários

4. Clonagem de expressão

14 Março 2024, 08:00 • Rita Zilhão

4. Clonagem  de expressão

Sistemas de expressão homóloga e heteróloga de genes. Vantagens e desvantagens da expressão heteróloga em E. coli. Configuração de vetores procarióticos de expressão. Sistemas de expressão induzíveis (Plac, PT7; ex. pET system). Elevada eficiência de tradução.

Fusões transcricionais e fusões traducionais. Construção de proteínas híbridas ou de fusão. Tags e genes repórter. Construção de proteínas híbridas ou de fusão. Produção de proteínas recombinantes em E. coli e em leveduras. Colunas de afinidade. Sistemas de deteção e purificação de proteínas. Expressão citoplasmática e expressão periplasmática ou secreção extracelular. Corpos de inclusão.

2ª PL

12 Março 2024, 09:00 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

2ª PL

11 Março 2024, 16:30 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

2ª PL

11 Março 2024, 13:00 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

1ª PL

8 Março 2024, 14:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão (Protocolos super-reduzidos devido a restrições no nº de aulas (Covid-19))

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.