Sumários

1ª PL

8 Março 2024, 10:30 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão (Protocolos super-reduzidos devido a restrições no nº de aulas (Covid-19))

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

cont. de 3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

7 Março 2024, 08:00 • Rita Zilhão

Vetores de clonagem: plasmídeos, fagos, cosmídios, e fagemídios para clonagem em Escherichia coli. Cromossomas artificiais: PACs, BACs e YACs. Vetores de origem viral utilizados em células eucarióticas (Lentivirus, Adenovirus e Adeno-associated vírus).

Sistemas físicos e químicos de introdução de DNA em células procarióticas e eucarióticas: transformação, transdução, transfeção, eletroporação, microinjeção, bombardeamento de partículas.

Tipo de hospedeiros: hospedeiros procarióticos e principais hospedeiros eucarióticos (células animais e vegetais, linhas celulares, culturas primárias e tecidos). Características das células hospedeiras de E. coli. Importância dos sistemas de modificação restrição na clonagem molecular Seleção e identificação de clones recombinantes: alfa-complementação.

Selecção e identificação de clones recombinantes: a utilização de substratos cromogénicos, a inactivação funcional. Análise das construções de moléculas de DNA recombinante – por análise de restrição e por PCR.

1ª PL

5 Março 2024, 09:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão (Protocolos super-reduzidos devido a restrições no nº de aulas (Covid-19))

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

1ª PL

4 Março 2024, 16:30 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão (Protocolos super-reduzidos devido a restrições no nº de aulas (Covid-19))

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

 

1ª PL

4 Março 2024, 13:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão (Protocolos super-reduzidos devido a restrições no nº de aulas (Covid-19))

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.