Sumários
cont. 6. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas e início de 7. Análise dos genes clonados e dos seus produtos
11 Abril 2024, 08:00 • Rita Zilhão
Cont. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas
Sondas homólogas, heterólogas e degeneradas. Condições de hibridação. Temperatura de fusão/desnaturação (Tm – melting temperature).
Sistemas de marcação: marcação radioactiva e não-radioactiva de DNA. Noções muito gerais sobre marcação de DNA por nick translation, por primers aleatórios e de extremidades 5’ e 3’ do DNA. Como se obtêm sondas de RNA (ribossondas).
7. Análise dos genes clonados e dos seus produtos
Hibridação Southern e algumas aplicações (ex. DNA fingerprinting).
Hibridação dot-blot (também para RNA). Técnica de footprinting (DNase I). Deteção de interações DNA/proteína. Técnica de retardação em gel (EMSA – electrophoretic mobility shift assay) aplicada ao DNA e RNA.