cont. 1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

16 Março 2026, 13:00 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

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1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

13 Março 2026, 14:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Problema sobre construções moleculares.

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1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

13 Março 2026, 10:30 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Problema sobre construções moleculares.

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fim de 3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

12 Março 2026, 08:00 • Rita Zilhão

Vetores de clonagem: plasmídeos, fagos, cosmídios, e fagemídios para clonagem em Escherichia coli. Cromossomas artificiais: PACs, BACs e YACs. Vetores de origem viral utilizados em células eucarióticas (Lentivirus, Adenovirus e Adeno-associated vírus).

Sistemas físicos e químicos de introdução de DNA em células procarióticas e eucarióticas: transformação, transdução, transfeção, eletroporação, microinjeção, bombardeamento de partículas.

Tipo de hospedeiros: hospedeiros procarióticos e principais hospedeiros eucarióticos (células animais e vegetais, linhas celulares, culturas primárias e tecidos). Características das células hospedeiras de E. coli. Importância dos sistemas de modificação restrição na clonagem molecular Seleção e identificação de clones recombinantes: alfa-complementação.

Seleção e identificação de clones recombinantes: a utilização de substratos cromogénicos, a inativação funcional. Análise das construções de moléculas de DNA recombinante – por análise de restrição e por PCR.

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1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

10 Março 2026, 09:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Problema sobre construções moleculares.

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