Sumários

1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

9 Março 2026, 16:30 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Problema sobre construções moleculares.

1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

9 Março 2026, 13:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Problema sobre construções moleculares.

cont. 1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

6 Março 2026, 14:00 • Rita Zilhão

Início protocolo transformação

Preparação de células competentes da estirpe hospedeira E. coli MC1061 pelo método de CaCl2.

Preparação de caixas de meio seletivo (Amp/X-gal). Explicação do tipo de seleção.

Transformação de E.coli

6 Março 2026, 10:30 • Rita Zilhão

Transformação de E.coli

cont. 3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

5 Março 2026, 08:00 • Rita Zilhão

cont. 3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

Métodos de produção de fragmentos de DNA e de modificação de extremidades (DNA polimerases, fosfatases de DNA, transferase terminal; adição de linkers e adaptadores).

A variedade de sistemas de clonagem. Noção de sistema vetor/hospedeiro. Características fundamentais dos vetores de clonagem: origem de replicação, marca de seleção, “polylinker”. Vetores shuttle.