Continuação dos vetores de clonagem

18 Março 2022, 08:00 • Rita Zilhão

Continuação dos vetores de clonagem: fagos, cosmídios, e fagemídios para clonagem em Escherichia coli. Cromossomas artificiais: PACs, BACs e YACs. Vetores de origem viral utilizados em células eucarióticas. Sistemas físicos e químicos de introdução de DNA em células procarióticas e eucarióticas: transformação, transdução, transfeção, eletroporação, microinjeção, bombardeamento de partículas.

Tipo de hospedeiros: hospedeiros procarióticos e principais hospedeiros eucarióticos (células animais e vegetais, linhas celulares, culturas primárias e tecidos). Características das células hospedeiras de E. coli. Selecção e identificação de clones recombinantes: a utilização de substratos cromogénicos, a inactivação funcional, a complementação de mutações definidas. Análise das construções de moléculas de DNA recombinante – por análise de restrição e por PCR

Construção de DNAs recombinantes

15 Março 2022, 17:00 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Purificação do fragmento a clonar (diferentes kits de purificação em coluna de afinidade)

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Construção de DNAs recombinantes

15 Março 2022, 09:00 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Purificação do fragmento a clonar (diferentes kits de purificação em coluna de afinidade)

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Construção de DNAs recombinantes

14 Março 2022, 12:30 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Purificação do fragmento a clonar (diferentes kits de purificação em coluna de afinidade)

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Construção de DNAs recombinantes

11 Março 2022, 14:00 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Purificação do fragmento a clonar (diferentes kits de purificação em coluna de afinidade)

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).