Construção de DNAs recombinantes

11 Março 2022, 10:30 • Rita Zilhão

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

Purificação do fragmento a clonar (diferentes kits de purificação em coluna de afinidade)

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

11 Março 2022, 08:00 • Rita Zilhão

3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

Clonagem molecular: significado, objectivos e etapas. O papel dos ácidos nucleicos na clonagem molecular. Construção de moléculas de DNA recombinante. Preparação de DNA vetor e DNA dador. Estratégias de ligação de DNA vetor e DNA dador (ligases de DNA). Clonagem dirigida e clonagem não dirigida.

Métodos de produção de fragmentos de DNA e de modificação de extremidades (DNA polimerases, fosfatases de DNA, transferase terminal; adição de linkers e adaptadores). A variedade de sistemas de clonagem. Noção de sistema vetor/hospedeiro. Características fundamentais dos vetores de clonagem: origem de replicação, marca de seleção, “polylinker”. Vetores shuttle. Vetores de clonagem: plasmídios.

Início dos protocolos sobre o tema "Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão"

8 Março 2022, 17:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão 

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico 

Início dos protocolos sobre o tema "Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão"

8 Março 2022, 09:00 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão 

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico 

Início dos protocolos sobre o tema "Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão"

7 Março 2022, 12:30 • Rita Zilhão

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão 

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico