Sumários
Visitas de estudo e TP citometria de fluxo
27 Outubro 2023, 09:00 • Rita Zilhão
TP de citometria de fluxo. Visita ao citómetro de fluxo (C8.5.50).
Visita à Unidade de Fluorescência (FCUL).
Visitas de estudo e TP citometria de fluxo
27 Outubro 2023, 08:00 • Rita Zilhão
TP de citometria de fluxo. Visita ao citómetro de fluxo (C8.5.50).
Visita à Unidade de Fluorescência (FCUL).
Apresentação de seminários
25 Outubro 2023, 08:00 • Rita Zilhão
Apresentação de seminários:
Champagne A, Jain P, Vélot L, Riopel J, Lefebvre V, Neveu B, Pouliot F. A transcriptional biosensor to monitor single cancer cell therapeutic responses by bioluminescence microscopy. Theranostics. 2022 Jan 1;12(2):474-492. doi: 10.7150/thno.63744. PMID: 34976196; PMCID: PMC8692902.
Saito Y, Kuse Y, Inoue Y, Nakamura S, Hara H, Shimazawa M. Transient acceleration of autophagic degradation by pharmacological Nrf2 activation is important for retinal pigment epithelium cell survival. Redox Biol. 2018 Oct;19:354-363. doi: 10.1016/j.redox.2018.09.004. Epub 2018 Sep 5. PMID: 30216854; PMCID: PMC6138993.
Rojo AI, Pajares M, García-Yagüe AJ, Buendia I, Van Leuven F, Yamamoto M, López MG, Cuadrado A. Deficiency in the transcription factor NRF2 worsens inflammatory parameters in a mouse model with combined tauopathy and amyloidopathy. Redox Biol. 2018 Sep;18:173-180. doi: 10.1016/j.redox.2018.07.006. Epub 2018 Jul 11. PMID: 30029164; PMCID: PMC6052199.
Citometria de fluxo
23 Outubro 2023, 09:00 • Rita Zilhão
Citometria de fluxo. Definição e fundamentos da citometria de fluxo: o que é a citometria de fluxo e como medi-la. Para que serve, vantagens e os diferentes citómetros. Descrição dos componentes do citómetro de fluxo: fluídica (ponto de interrogação, focagem hidrodinâmica, pressão diferencial (“flow rate”); óptica (sistema de lasers, emissão de luz - “foward scatter” (FSC) e “side scatter” (SSC) -, emissão de fluorescência – conjugar os diferentes fluorocromos, fluorescence spectra viwers, filtros; a eletrónica – detetores e processamento de sinal, como se mede, a importância da discriminação de dupletos; a digitilização e a apresentação dos resultados (histogramas, contour and density plots). Como preparar uma experiência de citometria de fluxo: a pergunta biológica, conhecer o citómetro que se usa, selecionar os reagentes (princípios e regras na escolha dos fluorocromos, a densidade antigénica, os anticorpos marcados em tandem, e preparar a amostra, controlos (biológicos, de qualidade, de coloração, de “gating”), optimização, configurar o instrumento (controlos de compensação) e a aquisição da amostra, a análise (representação dos resultados e “gating”) e estatística dos resultados (Mean e “Median fluorescence intensity” (MFI), softwares de tratamento de dados) a publicação dos resultados (Myflowcyt). Fontes úteis de consulta e estudo.
Aplicações e exemplos da citometria de fluxo na biologia molecular e celular. Estudos de função celular (diferenciação, proliferação, apoptose). Diferenciação celular: análise do estado de activação das células, identificação de antigénios de superfície e intracelulares (vias de sinalização). Proliferação: análise da divisão celular (CFSE e VP450) e análise do ciclo celular (iodeto de propídio e BRdU). Apoptose (iodeto de propídio, anexina V). Deteção de células vivas vs mortas. Marcação intracelular. Deteção intracelular de espécies reativas de oxigénio (ROX). Tecnologias associadas à citometria de fluxo: sorteamento celular
Citometria de fluxo
23 Outubro 2023, 08:00 • Rita Zilhão
Citometria de fluxo. Definição e fundamentos da citometria de fluxo: o que é a citometria de fluxo e como medi-la. Para que serve, vantagens e os diferentes citómetros. Descrição dos componentes do citómetro de fluxo: fluídica (ponto de interrogação, focagem hidrodinâmica, pressão diferencial (“flow rate”); óptica (sistema de lasers, emissão de luz - “foward scatter” (FSC) e “side scatter” (SSC) -, emissão de fluorescência – conjugar os diferentes fluorocromos, fluorescence spectra viwers, filtros; a eletrónica – detetores e processamento de sinal, como se mede, a importância da discriminação de dupletos; a digitilização e a apresentação dos resultados (histogramas, contour and density plots). Como preparar uma experiência de citometria de fluxo: a pergunta biológica, conhecer o citómetro que se usa, selecionar os reagentes (princípios e regras na escolha dos fluorocromos, a densidade antigénica, os anticorpos marcados em tandem, e preparar a amostra, controlos (biológicos, de qualidade, de coloração, de “gating”), optimização, configurar o instrumento (controlos de compensação) e a aquisição da amostra, a análise (representação dos resultados e “gating”) e estatística dos resultados (Mean e “Median fluorescence intensity” (MFI), softwares de tratamento de dados) a publicação dos resultados (Myflowcyt). Fontes úteis de consulta e estudo.
Aplicações e exemplos da citometria de fluxo na biologia molecular e celular. Estudos de função celular (diferenciação, proliferação, apoptose). Diferenciação celular: análise do estado de activação das células, identificação de antigénios de superfície e intracelulares (vias de sinalização). Proliferação: análise da divisão celular (CFSE e VP450) e análise do ciclo celular (iodeto de propídio e BRdU). Apoptose (iodeto de propídio, anexina V). Deteção de células vivas vs mortas. Marcação intracelular. Deteção intracelular de espécies reativas de oxigénio (ROX). Tecnologias associadas à citometria de fluxo: sorteamento celular