Sumários

Microscopia de fluorescência

23 Setembro 2019, 10:00 • Rita Zilhão

Microscopia de fluorescência. Diferentes técnicas de microscopia de fluorescência. Marcação fluorescente. Características, aplicações, vantagens e desvantagens da microscopia widefield, confocal, de deconvoluntion, de iluminação estruturada (SIM), de Lattice lightsheet (LLSM). Microscopia de fluorescência por multifotões. Microscopia intravital. TIRFM ( Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy). A evolução na resolução da microscopia de fluorescência: STORM ( Stochastic optical reconstruction microscopy ) de super-resolução. Dual color STORM. Zeiss Airyscan. Aplicações: Live cell imaging, FRAP ( Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP ( Fluorescence Loss In Photobleaching), FRET ( Fluorescence Resonance Energy Transfer), FLIM ( Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).

Microscopia de fluorescência

23 Setembro 2019, 09:00 • Rita Zilhão

Microscopia de fluorescência. Diferentes técnicas de microscopia de fluorescência. Marcação fluorescente. Características, aplicações, vantagens e desvantagens da microscopia widefield, confocal, de deconvoluntion, de iluminação estruturada (SIM), de Lattice lightsheet (LLSM). Microscopia de fluorescência por multifotões. Microscopia intravital. TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy). A evolução na resolução da microscopia de fluorescência: STORM (Stochastic optical reconstruction microscopy ) de super-resolução. Dual color STORM. Zeiss Airyscan. Aplicações: Live cell imaging, FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching), FLIP (Fluorescence Loss In Photobleaching), FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer), FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy).

Continuação do PCR em tempo real

20 Setembro 2019, 09:00 • Rita Zilhão

Continuação do PCR em tempo real: A escolha dos controlos positivos e negativos. A escolha do controlo endógeno. Ensaios de validação, cálculo da eficiência e curvas padrão. Interpretação dos resultados de qPCR e quantificação. Planeamento de um ensaio de PCR. Métodos de quantificação – quantificação absoluta (método da curva padrão), quantificação relativa (método da curva padrão, delta delta Ct e Pfaffl). PCR qualitativo – discriminação alélica, a importância da curva de fusão ( melting curve). Aplicações do qPCR.

Continuação do PCR em tempo real

20 Setembro 2019, 08:00 • Rita Zilhão

PCR em tempo real.

18 Setembro 2019, 10:00 • Rita Zilhão

PCR em tempo real. Princípios do PCR em tempo real. O parâmetro de medição da fluorescência: Ct (threshold cycle). Sistemas de deteção – compostos de ligação ao DNA não específicos, sondas específicas de sequências. O fenómeno de FRET. Sondas de hidrólise (ex. Taqman), sondas estruturadas (ex. Molecular Beacon), sondas de hibridação (ex. Light Cycler). Vantagens e desvantagens dos diferentes sistemas de deteção.