Aula 23 - Células estaminais - no embrião, no adulto e in vitro

27 Maio 2019, 15:00 • Solveig Thorsteinsdottir

Aula dada pela Prof. Gabriela Rodrigues a convite da docente da disciplina:

Células estaminais – no embrião, no adulto e in vitro.

Aula 22 - desenvolvimento dos membros dos tetrápodes 2

23 Maio 2019, 17:30 • Solveig Thorsteinsdottir

Resumo do desenvolvimento proximal-distal dos membros. Semelhanças entre o desenvolvimento ao longo do eixo antero-posterior do tronco e o desenvolvimento próximo-distal dos membros.

O eixo antero-posterior dos membros (mindinho-polgar). O “zone of polarizing activity” (ZPA) como centro posterorizante. O factor activo da ZPA é o sonic hedgehog. O mecanismo da acção do sonic hedgehog. Não é apenas um morfogénio simples. O papel do sonic hedgehog na determinação da identidade dos dedos.

A polarização dorso-ventral. O papel do Wnt7a na ectoderme. Indução de Lmx1 apenas no mesenquíma dorsal. O fenótipo do knock-out do Wnt7a.

A integração dos três centros sinalizadores (AER, ZPA e ectoderme dorsal). A interdependência dos três centros. O papel do Gremlin na manutenção destes três centros. Possíveis mecanismos do “colapso” dos três centros e a paragem do crescimento proximo-distal.

Apresentação de um modelo integrador (mas especulativo) do desenvolvimento dos membros dos tetrápodes.

Aula 7

21 Maio 2019, 13:00 • Solveig Thorsteinsdottir

Revelação das hibridações in situ da aula anterior segundo o seguinte protocolo:

Dia 4 da hibridação in situ

1.  Lavar 2 vezes 10 min em NTMT no “roller” a temperatura ambiente

Revelação (incubação com um substrato da fosfatase alcalina – o “BM Purple”):

2.  Colocar em BM Purple e incubar a temperatura ambiente no escuro até se ver claramente uma coloração roxa.
3.  Quando tiver suficientemente revelado (o tempo de revelação depende da sonda...), retirar o BM Purple e lavar 3 vezes em PBT
4.  Guardar em PBT com azida.

Aula 7

21 Maio 2019, 13:00 • Solveig Thorsteinsdottir

Revelação das hibridações in situ da aula anterior segundo o seguinte protocolo:

Dia 4 da hibridação in situ

1.  Lavar 2 vezes 10 min em NTMT no “roller” a temperatura ambiente

Revelação (incubação com um substrato da fosfatase alcalina – o “BM Purple”):

2.  Colocar em BM Purple e incubar a temperatura ambiente no escuro até se ver claramente uma coloração roxa.
3.  Quando tiver suficientemente revelado (o tempo de revelação depende da sonda...), retirar o BM Purple e lavar 3 vezes em PBT
4.  Guardar em PBT com azida.

Aula 7

21 Maio 2019, 08:00 • Solveig Thorsteinsdottir

Revelação das hibridações in situ da aula anterior segundo o seguinte protocolo:

Dia 4 da hibridação in situ

1.  Lavar 2 vezes 10 min em NTMT no “roller” a temperatura ambiente

Revelação (incubação com um substrato da fosfatase alcalina – o “BM Purple”):

2.  Colocar em BM Purple e incubar a temperatura ambiente no escuro até se ver claramente uma coloração roxa.
3.  Quando tiver suficientemente revelado (o tempo de revelação depende da sonda...), retirar o BM Purple e lavar 3 vezes em PBT
4.  Guardar em PBT com azida.