Sumários
Aula 14 - desenvolvimento de assimetria esquerda-direita
11 Abril 2019, 17:30 • Solveig Thorsteinsdottir
Gastrulação nos mamíferios (continuação da aula anterior).
O desenvolvimento de assimetria esquerda-direita, focando priniciplamente no modelo peixe zebra. O primeiro órgão a tornar-se assimétrico durante o desenvolvimento é o coração.
Quais as evidências genéticas de assimetría esquerda-direita? Expressão assimétrica de e.g. Nodal, Pitx2, Snail, Caronte na mesoderme lateral. Sobreexpressão do Nodal do lado direito causa randomização no torcimento do coração. A assimetría esquerda direita surge muito cedo. Estádio HH5 na galinha há expressão assimétrica de Nodal, Shh, Fgf8, Delta a volta do nó de Hensen. Também há sinalização assimétrica de Ca++. Assim, a assimetria esquerda-direta estabelece-se em fases: 1. A volta do nó; 2. Na mesoderme lateral; 3. Assimetria morfológica dos orgãos internos.
A descoberta dos monocílios do nó no embrião de ratinho. Experiêncas do Takeda et al 1999. A hipotese do fluxo nodal. A secreção contendo morfogénios como o Shh e a libertação do Ca++ como indutores de assimetria. Os movimentos das células a volta do nó como outro possível mecanismo de assimetria (Cui et al., 2009; Gros et al., 2009).
Desenvolvimento dos restantes órgãos internos derivados da endoderme e mesoderme esplâncnica.
Aula 4
9 Abril 2019, 13:00 • Solveig Thorsteinsdottir
Realização por parte dos alunos da colheita de embriões de galinha de 2 e 3 dias partir de ovos galados incubados. Observação dos embriões a lupa e determinação do estádio HH. Fixação em WISH para posterior execusão da técnica de hibridação in situ.
Muitos alunos também vieram no dia seguinte (4ª feira), entre às 9:30 e 13:00 para lavar os embriões em PBT e deshidratá-los em metanol (cada grupo demorou aproximadamente 30-40 minutos) e guardaram os embriões à -20ºC até a aula da hibridação in situ.
Protocolo da aula:
OBSERVAÇÃO DE EMBRIÕES DE GALINHA (2-3 dias) E A SUA FIXAÇÃO PARA HIBRIDAÇÃO IN SITU
- Lava o material cirúrgico com álcool e deixa secar.
- Retira um ovo da incubadora, orienta-o com o lado ponteagudo para cima e fura a parte redonda (parte de baixo) com uma pinça grossa.
- Corta a casca na parte ponteagúda com uma tesoura grossa e retira “a tampa” do ovo. Abre o suficiente para ver a gema e o embrião.
- Se o embrião for visível, coloca o ovo num suporte, retira o embrião da gema e coloca-o numa caixa de Petri grande (diâmetro 10 cm) com “Phosphate Buffered Saline” (PBS). Se o embrião não for visível, coloca o conteúdo do ovo numa caixa de Petri grande e procura o embrião. Método para tirar o embrião da gema: corta a membrana da gema à volta do embrião e remove o embrião com uma colher de café.
- Observa o embrião na lupa. Remove a gema a volta do embrião e, utilizando uma pipeta de Pasteur de plástico com a ponta cortada, transfere-o para uma caixa de Petri com PBS limpo. Quando tiver completamente livre de gema, transfere o embrião para uma caixa de Petri com fundo preto.
- Observa o embrião à lupa e determina o estádio HH, utilizando a tabela de desenvolvimento de Hamburger e Hamilton. Consulta tanto as imagens de embriões como a descrição de cada estádio para determinar com rigor o estádio do embrião.
- Leva o embrião para a hotte e transfere para um tubo com fixador 4% WISH (ver protocolo da hibridação in situ) e deixa “overnight” à 4ºC.
- (Opcional). No dia seguinte, retira o fixador na hotte e lava os embriões em PBT 2x5 min. Desidrata os embriões em metanol (ver protocolo da hibridação in situ) e guarda a -20ºC.
Not Taught.
9 Abril 2019, 13:00 • Solveig Thorsteinsdottir
A BDA tem uma carga horária de aulas práticas de 2h por semana mas são lecionadas em aulas de 4h 15 em 15 dias. Sendo assim nesta data, esta turma não teve aula prática.
Not Taught.
9 Abril 2019, 08:00 • Solveig Thorsteinsdottir
A BDA tem uma carga horária de aulas práticas de 2h por semana mas são lecionadas em aulas de 4h 15 em 15 dias. Sendo assim nesta data, esta turma não teve aula prática.