Sumários
Imunocitoquímica I: Fixação, permeabilização, bloqueio e anticorpo primário
23 Março 2023, 09:00 • Federico Herrera Garcia
Após uma breve introdução ao método de imunocitoquímica, ao protocolo e ao plano das aulas práticas, os alunos trataram as células HeLa com TNFalpha durante 15 a 120 minutos. Depois, fixaram células com metanol gelado a -20C durante 10 minutos, lavaram o excesso com PBS (3 vezes x 10 min cada) e permeabilizaram com Triton X-100 0,1% à temperatura ambiente durante 10 minutos. As amostras foram lavadas 3 vezes x 10 min cada com PBS e as amostras foram bloqueadas com Albumina de Soro Bovino a 5% durante 1 hora à temperatura ambiente. Depois, os anticorpos primários contra NFkB e STAT3 foram adicionados às amostras e incubados a 4C durante a noite. Durante os tempos de incubação, expliquei mais detalhadamente os princípios subjacentes a cada etapa do protocolo, e fiz um lembrete de como e quando a etapa seguinte deveria ser levada a cabo.
Dinâmica da Localização do Factor NF-B em células HeLa estimuladas com TNF- - Western Blot (Dia 3)
17 Março 2023, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB
em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 3)
Dinâmica da Localização do Factor NF-B em células HeLa estimuladas com TNF- - Western Blot (Dia 2)
16 Março 2023, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB
em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 2)
Dinâmica da Localização do Factor NF-B em células HeLa estimuladas com TNF- - Western Blot (Dia 3)
10 Março 2023, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB
em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 3)
Imunocitoquímica III: Microscopía
9 Março 2023, 14:00 • Federico Herrera Garcia
Nesta sessão, os estudantes tiveram de adquirir imagens suficientes para efetuarem uma análise quantitativa com o software gratuito ImageJ. Foi-lhes ensinado como utilizar o software do microscópio, e os princípios por detrás do microscópio. Os objectivos, as fontes de iluminação e o próprio microscópio foram descritos em pormenor. Tiraram fotografias de cada grupo experimental até obterem entre 50 e 100 células por condição experimental. Tiraram estas imagens numa pendrive para análise de imagem mais tarde.