Sumários
Dinâmica da Localização do Factor NF-B em células HeLa estimuladas com TNF- - Western Blot (Dia 2)
9 Março 2023, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB
em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 2)
Dinâmica da Localização do Factor NF-B em células HeLa estimuladas com TNF- - Western Blot (Dia 1)
3 Março 2023, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB
em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 1)
Imunocitoquímica II: Anticorpos Secundários
3 Março 2023, 09:00 • Federico Herrera Garcia
Nesta etapa, os alunos só tinham de adicionar os anticorpos secundários às amostras e incubá-las à temperatura ambiente e na escuridão durante 2 horas. Resumidamente, os anticorpos primários foram lavados com 3 lavagens com PBS durante 10 min cada, os anticorpos secundários numa solução de BSA 1% foram adicionados às amostras e, após 2 horas, os anticorpos secundários foram lavados com PBS 3 vezes durante 10 min cada. As lamelas de vidro com as células foram então montadas em lâminas de vidro com meio de montagem, e seladas com verniz de unhas. Durante os tempos de incubação, expliquei em detalhe os princípios subjacentes a estas etapas e antecipei o trabalho que faríamos no microscópio no dia seguinte.
Analise de imagens com ImageJ
2 Março 2023, 14:00 • Federico Herrera Garcia
Nesta aula, dei aos alunos um protocolo detalhado para a análise das imagens de imunocitoquímica através do ImageJ, e disponibilizei um fórum para abordar as suas questões e dúvidas. Os estudantes tiveram que analisar a fluorescência total em 10 imagens, e a fluorescência nuclear e citosólica num mínimo de 150 células em pelo menos 3 imagens diferentes. Acompanhei-os em cada passo do protocolo e discuti as suas dificuldades, desde a análise das imagens até à apresentação dos resultados. Expliquei que os dados deveriam ser apresentados com 1) imagens representativas dos resultados da experiência; 2) gráficos de barras para a fluorescência total; e 3) box plots ou violin plots no caso da translocação de fluorescência para o núcleo. Expliquei como deviam ser analisados os dados em caso de seguir uma distribuição normal ou não normal, e como deviam ser representadas as significações nas gráficas e nas suas legendas. A aula de análise de imagem finalizou com a resolução de uma serie de problemas de imunocitoquímica.
Dinâmica da Localização do Factor NF-B em células HeLa estimuladas com TNF- - Western Blot (Dia 1)
2 Março 2023, 09:30 • Carlos Miguel Ribeiro da Silva Farinha
Dinâmica da Localização do Factor NF-kB
em células HeLa estimuladas com TNF-a - Western Blot (Dia 1)