Sumários
Continuação da análise dos clones transformantes
10 Abril 2017, 12:30 • Rita Zilhão
Electroforese em gel de agarose para confirmação da presença do fragmento de 740 pb nos DNAs recombinantes selecionados
Análise e interpretação dos resultados de sequenciação dos DNAs dos clones seleccionados para confirmação da correcta inserção do fragmento de 740 pb.
Entrega dos cadernos de laboratório
Continuação da análise dos clones transformantes
7 Abril 2017, 10:30 • Rita Zilhão
Electroforese em gel de agarose para confirmação da presença do fragmento de 740 pb nos DNAs recombinantes selecionados
Análise e interpretação dos resultados de sequenciação dos DNAs dos clones seleccionados para confirmação da correcta inserção do fragmento de 740 pb.
Entrega dos cadernos de laboratório
Continuação da "Técnica de PCR" e "Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas"
7 Abril 2017, 08:00 • Rita Zilhão
Continuação da técnica de PCR: Variantes da técnica de PCR e suas aplicações: a síntese de cDNA e a RT-PCR, Nested-PCR, sistema ARMS, DOP-PCR e PCR multiplex. Técnicas de mutagénese dirigida baseada em PCR (PCR invertido e SOE-PCR (Splicing by overlapping extension). Selecção e identificação de mutantes. A utilidade do PCR em protocolos de screening.
6. Tecnologia de hibridação e de marcação de sondas
Sistemas de marcação: marcação radioactiva e não-radioactiva de DNA. Marcação de DNA por nick translation. Marcação de DNA por primers aleatórios. Marcação de extremidades 5’ e 3’ do DNA.
O que são técnicas de hibridação de ácidos nucleicos e o seu fundamento. Origem e caracterização das sondas de hibridação de ácidos nucleicos. Os diferentes tipos de sondas e como se obtêm sondas de RNA (ribossondas). Sondas homólogas, heterólogas e degeneradas. Condições de hibridação. Temperatura de fusão/desnaturação (Tm – melting temperature).
Análise dos clones transformantes
4 Abril 2017, 17:00 • Rita Zilhão
Análise dos clones transformantes
Análise e interpretação dos resultados obtidos na transformação de E. coli.
Repicagem dos transformantes para caixas de meio selectivo Amp/X-gal.
Extracção de DNA plasmídico dos transformantes, a partir de culturas de 18h de incubação.
Digestão com EcoRI/PstI dos DNAs dos clones selecionados.
Análise dos clones transformantes
4 Abril 2017, 09:00 • Rita Zilhão
Análise dos clones transformantes
Análise e interpretação dos resultados obtidos na transformação de E. coli.
Repicagem dos transformantes para caixas de meio selectivo Amp/X-gal.
Extracção de DNA plasmídico dos transformantes, a partir de culturas de 18h de incubação.
Digestão com EcoRI/PstI dos DNAs dos clones selecionados.