Sumários

Construção in vitro de DNAs recombinantes

13 Março 2017, 12:30 • Rita Zilhão

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vectores pNM/fragmento de 740 pb).

Construção in vitro de DNAs recombinantes

10 Março 2017, 10:30 • Rita Zilhão

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vectores pNM/fragmento de 740 pb).

Continuação do tema da "Clonagem molecular geral"

10 Março 2017, 08:00 • Rita Zilhão

Noção de sistema vector/hospedeiro. Características fundamentais dos vectores de clonagem. Plasmídios, fagos, cosmídios, e fagemídios para clonagem em Escherichia coli. O empacotamento de vírus de DNA in vitro. Cromossomas artificiais: PACs, BACs e YACs. Construção de bibliotecas genómicas. Noção e importância do estabelecimento de contigs. Vectores shuttle. Vectores utilizados em células eucarióticas.

Introdução ao tema das PLs e preparação dos vectores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

7 Março 2017, 17:00 • Rita Zilhão

1. Clonagem da região reguladora de um gene num vector de expressão

Objectivos da clonagem molecular

Preparação dos vectores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vectores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Electroforese em gel analítico Electroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vectores pNM480/481/482.

Electroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vectores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vectores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vectores e fragmento) a utilizar na clonagem.

CONCEITOS: purificação e armazenamento do DNA