Continuação dos vetores de clonagem.

9 Março 2023, 08:00 • Rita Zilhão

Continuação dos vetores de clonagem: fagos, cosmídios, e fagemídios para clonagem em Escherichia coli. Cromossomas artificiais: PACs, BACs e YACs. Vetores de origem viral utilizados em células eucarióticas. Sistemas físicos e químicos de introdução de DNA em células procarióticas e eucarióticas: transformação, transdução, transfeção, eletroporação, microinjeção, bombardeamento de partículas.

Tipo de hospedeiros: hospedeiros procarióticos e principais hospedeiros eucarióticos (células animais e vegetais, linhas celulares, culturas primárias e tecidos). Características das células hospedeiras de E. coli. Seleção e identificação de clones recombinantes: alfa-complementação.

Construção de DNAs recombinantes

7 Março 2023, 09:00 • Rita Zilhão

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Purificação de fragmentos de DNA a partir de gel de agarose.

Construção de DNAs recombinantes

6 Março 2023, 16:30 • Rita Zilhão

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Purificação de fragmentos de DNA a partir de gel de agarose.

Construção de DNAs recombinantes

6 Março 2023, 12:30 • Rita Zilhão

Construção de DNAs recombinantes

Condições de ligação e construção de DNAs recombinantes (vetores pNM/fragmento de 740 pb).

Purificação de fragmentos de DNA a partir de gel de agarose.

Engenharia Genética geral 1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

3 Março 2023, 14:00 • Rita Zilhão

 Engenharia Genética geral

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

CONCEITOS: purificação e armazenamento do DNA