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Engenharia Genética geral 1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

27 Fevereiro 2023, 12:30 • Rita Zilhão

 Engenharia Genética geral

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

CONCEITOS: purificação e armazenamento do DNA

Transformação de E. coli MC1061

24 Fevereiro 2023, 14:00 • Rita Zilhão

Transformação de E. coli MC1061 com as misturas de ligação e respectivos controlos.

Preparação da PL

24 Fevereiro 2023, 10:30 • Rita Zilhão

Preparação da PL

Propriedades físicas e químicas dos ácidos nucleicos e os seus métodos de visualização e quantificação.

24 Fevereiro 2023, 08:30 • Rita Zilhão

Propriedades físicas e químicas dos ácidos nucleicos e os seus métodos de visualização e quantificação. Fundamento de alguns processos de isolamento e purificação dos ácidos nucleicos. Métodos de quantificação dos ácidos nucleicos baseados na espectrofotometria e em matrizes (agarose e poliacrilamida) sujeitas a eletroforese. Mapa de restrição.

Continuação dos isoesquizómeros.

23 Fevereiro 2023, 08:00 • Rita Zilhão

Continuação dos isoesquizómeros. Importância dos sistemas de restrição/modificação em clonagem molecular. Enzimas de modificação: nucleases, polimerases, fosfatases e cinases. DNA ligases.