Engenharia Genética geral 1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

3 Março 2023, 10:30 • Rita Zilhão

 Engenharia Genética geral

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

CONCEITOS: purificação e armazenamento do DNA

Continuação da manipulação génica e clonagem molecular geral

3 Março 2023, 08:30 • Rita Zilhão

Métodos de produção de fragmentos de DNA e de modificação de extremidades (DNA polimerases, fosfatases de DNA, transferase terminal; adição de linkers e adaptadores). A variedade de sistemas de clonagem. Noção de sistema vetor/hospedeiro. Características fundamentais dos vetores de clonagem: origem de replicação, marca de seleção, “polylinker”. Vetores shuttle. Vetores de clonagem: plasmídios.

3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

2 Março 2023, 08:00 • Rita Zilhão

3. Metodologia da manipulação génica e clonagem molecular geral

Clonagem molecular: significado, objetivos e etapas. O papel dos ácidos nucleicos na clonagem molecular. Construção de moléculas de DNA recombinante. Preparação de DNA vetor e DNA dador. Estratégias de ligação de DNA vetor e DNA dador (ligases de DNA). Clonagem dirigida e clonagem não dirigida.

Engenharia Genética geral 1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

28 Fevereiro 2023, 09:00 • Rita Zilhão

 Engenharia Genética geral

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

CONCEITOS: purificação e armazenamento do DNA

Engenharia Genética geral 1. Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão Objetivos da clonagem molecular Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

27 Fevereiro 2023, 16:30 • Rita Zilhão

 Engenharia Genética geral

1.       Clonagem da região reguladora de um gene num vetor de expressão

Objetivos da clonagem molecular

Preparação dos vetores de clonagem e do fragmento de DNA a clonar

Digestão dos vetores pNM480/481/482 com as enzimas de restrição EcoRI/PstI.

Eletroforese em gel analítico Eletroforese em gel preparativo e purificação dos fragmentos EcoRI/PstI de 740 pb, a clonar nos vetores pNM480/481/482.

Eletroforese em gel preparativo do plasmídio recombinante pRZA18 digerido com EcoRI/PstI e purificação do fragmento de 740 pb, a clonar dos vetores pNM480/481/482.

Visualização em gel de agarose dos produtos de digestão dos vetores e do fragmento purificado, e avaliação das quantidades relativas de DNA (vetores e fragmento) a utilizar na clonagem.

CONCEITOS: purificação e armazenamento do DNA